[發(fā)明專利]一種抗HCV NS3/4A蛋白的人源性單鏈抗體基因

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210493408.8
• 申請日: 2012-11-27
• 公開（公告）號: CN103014011A
• 公開（公告）日: 2013-04-03
• 發(fā)明（設計）人: 楊敬;徐志凱;雷迎峰;陳仁安;汪樺;尹文;呂欣;田江紅
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第四軍醫(yī)大學
• 主分類號: C12N15/13
• 分類號: C12N15/13;C12N15/10;C12N15/70;C07K19/00;C40B50/06
• 代理公司: 西安吉盛專利代理有限責任公司 61108
• 代理人: 邱志賢

1.一種抗HCV?NS3/4A蛋白的人源性單鏈抗體基因，其特征是：所述抗HCV?NS3/4A蛋白的人源性單鏈抗體基因是由連接肽連接抗體的VL和VH基因組成。

2.根據權利要求1所述的一種抗HCV?NS3/4A蛋白的人源性單鏈抗體基因，其特征是：所述連接肽連接抗體的VL和VH基因共由729個堿基組成，

No1：其核苷酸序列：

ATGGAGGTGCAGCTCGAGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAGCAGCTATGCCATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCAGCTATTAGTGGTAGCGGTGGTAACACATACTACGCAGAGTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACGATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTATATTTCTGTGCGAAAGTAAGGTTCGGGGAGTTATCATCAATTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGGGAGTGCATCCGCCCCAACCCTTTTCCCCCTCGTCTCCGACATCCAGATGACCCAGTCTCCTTCCTCCCTGGCTGCATCTGTGGGGGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCGAGCCAGCATATTAGCAATTCTTTGGCCTGGTATCAGCAGAGACCAGGCAAAGTTCCCAGTCTCCTGATCTATAGGGCGTCCACTTTACAATCAGGGGTCACATCTCGCTTCAGCGGCAGTGGATTTGGGACGCACTTCGCTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAGGATGTTGCGACTTACTATTGTCAAATGCATGACAGCGCCCCCGGCACTTTTGGCCAGGGGACCAAGGTGGAGATCAATCGAACT

No2：其氨基酸序列：

MEVQLEESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGNTYYAESVKGRFTISRDDSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYFCAKVRFGELSSIDYWGQGTLVTVSSGSASAPTLFPLVSDIQMTQSPSSLAASVGDRVTITCRASQHISNSLAWYQQRPGKVPSLLIYRASTLQSGVTSRFSGSGFGTHFALTISSLQPEDVATYYCQMHDSAPGTFGQGTKVEINRT*

*為終止碼。

3.根據權利要求1所述的一種抗HCV?NS3/4A蛋白的人源性單鏈抗體基因，其特征是：所述抗HCV?NS3/4A蛋白的人源性單鏈抗體基因的制備方法包括如下步驟：步驟1）制備核糖展示單鏈抗體文庫；

步驟2）克隆抗NS3/4A蛋白的單鏈抗體基因；

步驟3）構建蛋白穿膜域PTD與抗NS3/4A蛋白的單鏈抗體基因融合表達載體；

步驟4）制備PTD-NS3/4A?scFv的蛋白表達；

步驟5）PTD-NS3/4A?scFv蛋白阻斷HCV復制的效應評價。

4.根據權利要求3所述的一種抗HCV?NS3/4A蛋白的人源性單鏈抗體基因，其特征是：所述制備核糖展示單鏈抗體文庫是用分離的HCV陽性患者外周血淋巴細胞提取mRNA，合成cDNA并擴增重鏈和輕鏈可變區(qū)基因，構建核糖體展示單鏈抗體文庫。

5.根據權利要求3所述的一種抗HCV?NS3/4A蛋白的人源性單鏈抗體基因，其特征是：所述克隆抗NS3/4A蛋白的單鏈抗體基因是將步驟1）獲得的核糖體展示單鏈抗體庫制備ScFv-核糖體-mRNA復合物，以表達純化的NS3/4A蛋白固相化于磁珠上進行篩選，經過3輪篩選和富集，最后一輪DNA轉入到噬菌體pHEN1載體并轉化HB2151，誘導表達后取上清進行ELISA試驗，確定1個結合活性最強的單鏈抗體。