[發(fā)明專利]一種放線菌710發(fā)酵條件的選擇方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210493376.1
• 申請(qǐng)日: 2012-11-27
• 公開（公告）號(hào): CN103014131A
• 公開（公告）日: 2013-04-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊鐵順;趙亮;柯盛發(fā);趙永和;劉青;吳建平;閔宇
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 天津?yàn)I海國際花卉科技園區(qū)股份有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/18
• 分類號(hào): C12Q1/18
• 代理公司: 天津?yàn)I?？凭曋R(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 12211
• 代理人: 孫春玲

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于放線菌生物防治技術(shù)領(lǐng)域，尤其是涉及一種放線菌710發(fā)酵條件的選擇方法。

背景技術(shù)

放線菌菌株710是一種稀有菌株，能夠?qū)Ψ言缫哂休^好的抑制作用。因此Streptomyces?sp．710可以作為有潛在開發(fā)價(jià)值的抗生素產(chǎn)生菌。為了進(jìn)一步開發(fā)利用該菌，有必要對(duì)其發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行了選擇，提高抗生素的產(chǎn)量，將會(huì)對(duì)開發(fā)新型農(nóng)藥提供依據(jù)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種操作方法簡(jiǎn)單、實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確的放線菌710發(fā)酵條件的選擇方法。

本發(fā)明的技術(shù)方案是一種放線菌710發(fā)酵條件的選擇方法，包括如下步驟：

(1)、用接種環(huán)將放線菌710菌株的孢子接種于高氏I號(hào)培養(yǎng)基斜面上，“Z”字法，在28℃下培養(yǎng)7d，得到待發(fā)酵的菌株；

(2)、用無菌接種環(huán)挑取3～5環(huán)接種于裝有100mL液體發(fā)酵培養(yǎng)基的250mL三角瓶中，25℃，250r/min條件下振蕩培養(yǎng)4d，取出將其用濾紙濾出上清液，得到發(fā)酵液，其中液體發(fā)酵培養(yǎng)基中含有葡萄糖10g、蛋白胨30g、NaCl?2.5g、CaCO₃2.0g、H₂O?1000ml、小米浸種10.4g；

(3)、以番茄早疫為供試菌，將發(fā)酵液與PDA培養(yǎng)基混合以1：9、2：8、3：7制成平板接入番茄早疫的菌餅(選出最佳發(fā)酵液與PDA培養(yǎng)基混合的比例)，以無菌水處理作為對(duì)照，培養(yǎng)2天，采用十字交叉法測(cè)定抑菌圈直徑，每個(gè)處理重復(fù)3次；

(4)、采用單因子實(shí)驗(yàn)，測(cè)定碳源、氮源、NaCl進(jìn)行選擇，在單因子測(cè)試的基礎(chǔ)上用正交試驗(yàn)進(jìn)行選擇。

優(yōu)選的，步驟(4)中碳源的選擇方法，采用如下步驟進(jìn)行：在液體發(fā)酵培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，其他成分不變而改變碳源的種類，選取三種濃度10.0g/L、15.0g/L、20.0g/L的葡萄糖，每個(gè)處理重復(fù)3次，進(jìn)行搖床發(fā)酵，測(cè)定發(fā)酵液抑菌活性，選擇最佳濃度，在其基礎(chǔ)上分別加入蔗糖、乳糖、小米浸種作碳源進(jìn)行單因子試驗(yàn)，蔗糖、乳糖、小米分別取三種濃度10.0g/L、15.0g/L、20.0g/L，每個(gè)處理重復(fù)3次，進(jìn)行搖床發(fā)酵，測(cè)定發(fā)酵液抑菌活性。

優(yōu)選的，步驟(4)中氮源的選擇方法，采用如下步驟進(jìn)行：固定初始液體發(fā)酵培養(yǎng)基的碳源為10.0g/L的葡萄糖和15.0g/L的小米，其他成分不變，改變氮源種類，分別加入蛋白胨、酵母膏以及(NH4)2SO4作為氮源作為單因子試驗(yàn)，并蛋白胨、酵母膏以及(NH4)2SO4分別設(shè)計(jì)3.0g/L、6.0g/L、9.0g/L三個(gè)濃度水平，每個(gè)處理重復(fù)3次，進(jìn)行藥瓶發(fā)酵，測(cè)定發(fā)酵液抑菌活性。

優(yōu)選的，步驟(4)中NaCl的選擇方法，固定碳源為3.0g/L酵母膏，其他成分不變，分別加入0.0、2.5、5.0、7.5、10.0g/L的NaCl，每個(gè)處理重復(fù)3次，進(jìn)行搖瓶發(fā)酵，測(cè)定發(fā)酵液抑菌活性。

優(yōu)選的，步驟(4)中正交試驗(yàn)，在以上單因子實(shí)驗(yàn)結(jié)果的基礎(chǔ)上，選取葡萄糖、酵母膏、NaCl三個(gè)因素，分別取3個(gè)水平進(jìn)行正交試驗(yàn)，按照L9(33)安排實(shí)驗(yàn)。

一種根據(jù)如上所述的放線菌710發(fā)酵條件的選擇方法確定的放線菌710菌株的培養(yǎng)基，其特征在于：包括葡萄糖10.0g，酵母膏3.0g，NaCl?5.0g，小米15g，CaCO₃2.0g，水1000mL。

本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)及效果：本發(fā)明選擇合適的培養(yǎng)基以及合理的供試菌，試驗(yàn)步驟實(shí)際合理，通過本發(fā)明的操作方法，可以得到有效的放線菌710發(fā)酵條件，提高代謝產(chǎn)物抑菌活性，可以提高抗生素的產(chǎn)量，將會(huì)對(duì)開發(fā)新型農(nóng)藥提供依據(jù)。

具體實(shí)施方式

為了理解本發(fā)明，下面通過具體的實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明。

一種放線菌710發(fā)酵條件的選擇方法，包括如下步驟：

(1)、用接種環(huán)將放線菌710菌株的孢子接種于高氏I號(hào)培養(yǎng)基斜面上，“Z”字法，在28℃下培養(yǎng)7d，得到待發(fā)酵的菌株；

(2)、用無菌接種環(huán)挑取3～5環(huán)接種于裝有100mL液體發(fā)酵培養(yǎng)基的250mL三角瓶中，25℃，250r/min條件下振蕩培養(yǎng)4d，取出將其用濾紙濾出上清液，得到發(fā)酵液，其中液體發(fā)酵培養(yǎng)基中含有葡萄糖10g、蛋白胨30g、NaCl?2.5g、CaCO₃2.0g、H₂O?1000ml、小米浸種10.4g；