[發明專利]一種放線菌710發酵條件的選擇方法

在審

• 申請號: 201210493376.1
• 申請日: 2012-11-27
• 公開（公告）號: CN103014131A
• 公開（公告）日: 2013-04-03
• 發明（設計）人: 楊鐵順;趙亮;柯盛發;趙永和;劉青;吳建平;閔宇
• 申請（專利權）人: 天津濱海國際花卉科技園區股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/18
• 分類號: C12Q1/18
• 代理公司: 天津濱?？凭曋R產權代理有限公司 12211
• 代理人: 孫春玲

1.一種放線菌710發酵條件的選擇方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)、用接種環將放線菌710菌株的孢子接種于高氏I號培養基斜面上，“Z”字法，在28℃下培養7d，得到待發酵的菌株；

(2)、用無菌接種環挑取3～5環接種于裝有100mL液體發酵培養基的250mL三角瓶中，25℃，250r/min條件下振蕩培養4d，取出將其用濾紙濾出上清液，得到發酵液，其中液體發酵培養基中含有葡萄糖10g、蛋白胨30g、NaCl?2.5g、CaCO₃2.0g、H₂O?1000ml、小米浸種10.4g；

(3)、以番茄早疫為供試菌，將發酵液與PDA培養基混合以1：9、2：8、3：7制成平板接入番茄早疫的菌餅，以無菌水處理作為對照，培養2天，采用十字交叉法測定抑菌圈直徑，每個處理重復3次；

(4)、采用單因子實驗，測定碳源、氮源、NaCl進行選擇，在單因子測試的基礎上用正交試驗進行選擇。

2.如權利要求1所述的放線菌710發酵條件的選擇方法，其特征在于，步驟(4)中碳源的選擇方法，采用如下步驟進行：在液體發酵培養基的基礎上，其他成分不變而改變碳源的種類，選取三種濃度10.0g/L、15.0g/L、20.0g/L的葡萄糖，每個處理重復3次，進行搖床發酵，測定發酵液抑菌活性，選擇最佳濃度，在其基礎上分別加入蔗糖、乳糖、小米浸種作碳源進行單因子試驗，蔗糖、乳糖、小米分別取三種濃度10.0g/L、15.0g/L、20.0g/L，每個處理重復3次，進行搖床發酵，測定發酵液抑菌活性。

3.如權利要求1所述的放線菌710發酵條件的選擇方法，其特征在于，步驟(4)中氮源的選擇方法，采用如下步驟進行：固定初始液體發酵培養基的碳源為10.0g/L的葡萄糖和15.0g/L的小米，其他成分不變，改變氮源種類，分別加入蛋白胨、酵母膏以及(NH4)2SO4作為氮源作為單因子試驗，并蛋白胨、酵母膏以及(NH4)2SO4分別設計3.0g/L、6.0g/L、9.0g/L三個濃度水平，每個處理重復3次，進行藥瓶發酵，測定發酵液抑菌活性。

4.如權利要求1所述的放線菌710發酵條件的選擇方法，其特征在于，步驟(4)中NaCl的選擇方法，固定碳源為3.0g/L酵母膏，其他成分不變，分別加入0.0、2.5、5.0、7.5、10.0g/L的NaCl，每個處理重復3次，進行搖瓶發酵，測定發酵液抑菌活性。

5.如權利要求1所述的放線菌710發酵條件的選擇方法，其特征在于，步驟(4)中正交試驗，在以上單因子實驗結果的基礎上，選取葡萄糖、酵母膏、NaCl三個因素，分別取3個水平進行正交試驗，按照L9(33)安排實驗。

6.一種根據權利要求1～5中任一項所述的放線菌710發酵條件的選擇方法確定的放線菌710菌株的培養基，其特征在于：包括葡萄糖10.0g，酵母膏3.0g，NaCl?5.0g，小米15g，CaCO₃2.0g，水1000mL。