[發明專利]糖類抗原50磁微粒化學發光免疫定量檢測試劑盒及其制備方法

有效

• 申請號: 201210472473.2
• 申請日: 2012-11-20
• 公開（公告）號: CN103018445A
• 公開（公告）日: 2013-04-03
• 發明（設計）人: 劉萍;范利花
• 申請（專利權）人: 博奧賽斯（天津）生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/574
• 分類號: G01N33/574;G01N33/531
• 代理公司: 天津濱海科緯知識產權代理有限公司 12211
• 代理人: 李莉華

1.糖類抗原50磁微粒化學發光免疫定量檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括：

1）糖類抗原50校準品，濃度為0、5、10、25、50、100KU/mL，校準品稀釋液為50%牛血清；

2）偶聯有鏈霉親和素的磁微粒懸浮液；

3）生物素標記的糖類抗原50抗體；

4）糖類抗原50抗體酶結合物，所用的酶為辣根過氧化物酶，辣根過氧化物酶純度RZ≥3.0，活性≥250U/mL；

5）糖類抗原50質控品；

6）化學發光液A液和B液；

7）20倍濃縮洗液；

8）反應管。

2.根據權利要求1所述的糖類抗原50磁微粒化學發光免疫定量檢測試劑盒，其特征在于，所述的發光液A液的主要成分為魯米諾，B液的主要成分是過氧化脲。

3.根據權利要求1所述的糖類抗原50磁微粒化學發光免疫定量檢測試劑盒，其特征在于，所述的磁微粒是表面包裹帶有氨基或羧基活性基團的四氧化三鐵，粒徑1～2um。

4.根據權利要求1所述的糖類抗原50磁微粒化學發光免疫定量檢測試劑盒，其特征在于，所述的糖類抗原50質控品包括低值質控品和高值質控品。

5.根據權利要求1所述的糖類抗原50磁微粒化學發光免疫定量檢測試劑盒，其特征在于，所述的反應管的材料是透明聚苯乙烯、聚乙烯、聚丙烯或玻璃。

6.一種制備所述權利要求1的試劑盒的方法，其特征在于包括以下步驟：

（1）糖類抗原50校準品的配制：

將CA50純品用50%牛血清稀釋成系列梯度，濃度分別為0、5、10、25、50、100KU/mL；

（2）糖類抗原50質控品的配制：

將糖類抗原50用含有50%牛血清溶液稀釋配制低值質控品高值質控品，濃度范圍分別為8～12KU/mL和29.6～44.4KU/mL；

（3）磁性顆粒-鏈霉親和素懸浮液的制備：

取100mL0.1mol/L?2-嗎啉乙磺酸溶液，依次加入10mg磁性顆粒和3mg鏈酶親和素，攪拌30min，然后加入10mg/mL碳二亞胺鹽酸鹽溶液3.5uL，反應1h后，使用磁力架吸附，靜止10min，移去液體，加入10mL0.01mol/L?PBS，重復上述過程，共洗滌3次，最后用0.01mol/L?PBS定溶至1L即可；

（4）生物素標記的CA50抗體的制備

取0.5mg?CA50抗體，用硼酸鹽緩沖液在2～8℃下透析1～3h；將透析后的抗體加入25ug生物素，同時加入二甲基亞砜，最終濃度為10%，避光反應3h，緩慢振蕩；在上述溶液中加入250uL1mol/L氯化銨溶液，常溫避光反應30～60min；用0.01mol/L?PBS溶液在2～8℃下透析2天，期間換液3～5次；

（5）糖類抗原50抗體酶結合物的制備

采用高碘酸鈉氧化法將糖類抗原50抗體與辣根過氧化物酶進行偶聯后，用酶稀釋液將其稀釋至工作濃度1:6000，并加入5～20%酶穩定劑，儲存于2~8℃；

（6）20倍濃縮洗液的配制

20濃縮洗液包括58g/L磷酸氫二鈉，5.92g/L磷酸二氫鈉，180g/L?NaCl，10mL/LTween-20和1‰Proclin300；

（7）化學發光液A液和B液的配制

A液為0.7g/L魯米諾，0.165g/L對碘酚，緩沖液為pH8.6的5mmol/L?Tris·HCl，避光保存；B液為0.675g/L過氧化脲，用工藝用水配制；A液和B液在使用前5min混合；

（8）組裝：將上述試劑組裝成盒，儲存于2~8℃；

（9）對采用該方法制的的試劑盒的進行物理檢查，準確度、劑量-反應曲線的線性、精密度、特異性、靈敏度、質控品的測定值和穩定性進行測定。