[發明專利]一種基于點擊化學仿生分子印跡電化學傳感器的制備及對食品過敏原的檢測

有效

• 申請號: 201210472177.2
• 申請日: 2012-11-21
• 公開（公告）號: CN102944590A
• 公開（公告）日: 2013-02-27
• 發明（設計）人: 葛慎光;顏梅;于京華;葛磊;黃加棟;張彥;楚成超;王盼盼;劉芳;劉偉艷;孫國強
• 申請（專利權）人: 濟南大學
• 主分類號: G01N27/26
• 分類號: G01N27/26
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種基于點擊化學食品過敏原仿生分子印跡電化學傳感器的制備及應用，其特征是包括以下步驟：

（1）選擇與電極表面固定的疊氮烷基硫醇，制備疊氮端基的自組裝單層膜；

（2）通過點擊化學反應，對疊氮端基的自組裝單層膜進行端基烯基功能化；

（3）選擇能與過敏原反應合成過敏原仿生分子印跡聚合物(MIPs)的功能單體；

利用現有方法制備出石墨烯材料，摻入到仿生分子印跡聚合物；

（5）按一定物質的量比將食品過敏原的模板分子、功能單體、石墨烯、交聯劑、致孔劑、引發劑和有機溶劑混合均勻，制備分子印跡聚合物溶液；

（6）將分子印跡聚合物溶液滴于經過（2）處理過的電極表面，紫外光引發制備摻有石墨烯的仿生分子印跡聚合物。

2.根據權利要求1所述點擊化學食品過敏原仿生分子印跡的制備方法,其特征是：所述食品過敏原仿生分子印跡聚合物的模板分子、功能單體、交聯劑、致孔劑、引發劑和有機溶劑的物質的量比為0.1～1∶1∶0.5～5∶20～55∶0.05～0.2∶1.5～30，每毫升中摻入10mg石墨烯。

3.?根據權利要求1所述點擊化學食品過敏原仿生分子印跡的制備方法,其特征是：所述摻有石墨烯材料的仿生分子印跡聚合物MIPs修飾到傳感器檢測痕量食品過敏原的方法，其特征是包括如下步驟：?

含過敏原食品經正己烷4℃浸提過夜，冷凍離心，收集上清液；用30%-50%飽和度硫酸銨沉淀的蛋白質組分溶解在PBS中，分別加硫酸至pH5.2或pH4.5等電點，離心后沉淀物溶液在PBS中，得到食品過敏原；

將所用金電極（Ф=4mm）用0.05μm的鋁粉進行拋光，用piranha溶液（H₂SO₄/H₂O₂=3:1）浸泡5min，二次蒸餾水洗滌，氮氣氛干燥，將清洗過的電極在0.5mol/L的H₂SO₄溶液中于-0.8~1.5V范圍內進行循環伏安掃描至穩定，再用二次蒸餾水清洗干凈，氮氣氛下干燥4℃保存使用；

將（2）處理好的金電極，在1mmol/L硫代癸烷和2mmol/L疊氮十一烷基硫醇混合液中孵育24h，然后用二次蒸餾水洗滌干凈，氮氣吹干；

將步驟（3）制備好的電極浸入到丙烯酸丙炔酯溶液中，溶液中含有抗壞血酸和硫酸銅，避光放置20h，先用甲醇洗滌，然后二次蒸餾水洗滌，晾干；

將步驟（4）中晾干的工作電極上滴加MIPs溶液20μL，紫外光（365nm）下誘導聚合反應1h，然后將工作電極用洗脫劑洗脫10-15分鐘，在室溫下干燥5-10分鐘，成功制備過敏原仿生分子印跡膜電化學傳感器，保存在4℃的冰箱中備用；

將制得的過敏原分子印跡膜電極連接到電化學工作站，對樣品提取液中的過敏原進行檢測。

4.?根據權利要求1所述的疊氮烷基硫醇為疊氮十一烷基硫醇，丙烯酸丙炔酯對疊氮端基的自組裝單層膜進行端基烯基功能化。

5.?根據權利要求1所述的模板食品過敏原可以是水溶性并與功能單體、交聯單體相容。

6.?根據權利要求1所述洗脫液為可以將模板蛋白從印跡膜上洗脫的緩沖溶液、鹽溶液、堿溶液和變性劑等，包括各種濃度的磷酸鹽緩沖溶液或NaCl鹽溶液和NaOH堿溶液或變性劑十二烷基硫酸鈉等。