[發明專利]一種發酵培養基及用該培養基發酵生產胸苷磷酸化酶的方法

有效

• 申請號: 201210470021.0
• 申請日: 2012-11-20
• 公開（公告）號: CN103305487A
• 公開（公告）日: 2013-09-18
• 發明（設計）人: 李紅梅;王偉潔;陳寶珍;薛芳
• 申請（專利權）人: 上海理工大學
• 主分類號: C12N9/12
• 分類號: C12N9/12;C12R1/24
• 代理公司: 上海德昭知識產權代理有限公司 31204
• 代理人: 郁旦蓉

1.一種適合短乳桿菌生產胸苷磷酸化酶的發酵培養基，其特征在于，包含：濃度在5~10g/L范圍內的NaCl，濃度在20~30g/L范圍內的葡萄糖，濃度在10~20g/L范圍內的酵母膏，濃度在10~20g/L范圍內的蛋白胨，濃度在10~20mmol/L范圍內的胸苷，以及雙蒸水。

2.一種基于權利要求1所述發酵培養基發酵短乳桿菌產胸苷磷酸化酶的發酵方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟1，將短乳桿菌劃線接種到固體斜面培養基上培養16~24h，得到含有短乳桿菌的固體斜面培養基；

步驟2，取一定量的酵母膏溶于雙蒸水中，調節其pH值在6.0~8.0之間，在121℃條件下滅菌15~20min，得到酵母膏含量在1~10%（質量分數）之間的活化液；

步驟3，在無菌環境下從所述固體斜面培養基上挑取所述短乳桿菌接種到所述活化液中，在30~40℃下活化8~12h，得到含有活化的短乳桿菌菌體的液體；

步驟4，將所述含有活化的短乳桿菌菌體的液體按照接種量1~10%（體積分數）接入經過滅菌的所述發酵培養基中，在溫度為30~40℃，搖床轉速為90~180r/min的條件下，發酵培養8~16h，得到含胸苷磷酸化酶的發酵液；

步驟5，將所述發酵液放置于離心管中，在3000~5000r/min條件下離心10~30min，離心管內得到的沉淀即為含有胸苷磷酸化酶的短乳桿菌濕菌體。

3.根據權利要求2所述的發酵方法，其特征在于：

其中，在所述含有胸苷磷酸化酶的短乳桿菌濕菌體中所述胸磷酸化酶的酶活在0.30~0.50U/mg_濕菌體。