[發(fā)明專利]一種防治棉花病害的生物菌劑及其制備方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210466796.0
• 申請日: 2012-11-19
• 公開（公告）號: CN102972445A
• 公開（公告）日: 2013-03-20
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李東方
• 申請（專利權(quán)）人: 新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團農(nóng)六師農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所
• 主分類號: A01N63/02
• 分類號: A01N63/02;A01P3/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種防治棉花病害的生物菌劑，該生物菌劑以如下3種菌株ACCC10620、ACCC10700和ACCC40051的發(fā)酵液作為活性成分，輔料為天然載體物質(zhì)、促生長劑、保護劑和pH調(diào)節(jié)劑，其中活性成分與輔料的重量比為4-7∶1，活性成分中各菌株的發(fā)酵液的重量比為1∶1∶1。

2.一種根據(jù)權(quán)利要求1的生物菌劑的制備方法，其采用如下方法制得：

步驟一、制備發(fā)酵液

(1)制備菌株ACCC10620的發(fā)酵液：液體發(fā)酵培養(yǎng)基配方：牛肉膏-1％，蛋白胨-1％，NaCl-0.5％，羥烯腺嘌呤-0.3g，烯酰腺嘌呤-0.3g，黃原膠-3g，瓊脂-5g，pH值調(diào)至7.2，清水補齊至1000g；按上述比例配置好所需發(fā)酵培養(yǎng)基的量，然后將菌株于無菌條件下接入液體發(fā)酵培養(yǎng)基中，在30℃條件下于搖床上振蕩培養(yǎng)72小時后，至有效活菌數(shù)均達到2.0×10⁹個/ml制得一級種子；然后將培養(yǎng)好的一級種子按3％的比例，接入裝有按上述比例配好的已經(jīng)滅菌并冷卻后的發(fā)酵罐中進行發(fā)酵生產(chǎn)，發(fā)酵培養(yǎng)溫度30℃，通氣量開始在1∶1.2(v.v.m)，培養(yǎng)24小時后增至1∶1.5(v.v.m)，48小時后降至1∶1(v.v.m)，發(fā)酵至72小時發(fā)酵完畢，經(jīng)過鏡檢發(fā)酵液中ACCC10620：枯草芽孢桿菌的菌量達到20-30億個/ml時為合格菌液；

(2)制備菌株ACCC10700的發(fā)酵液：液體發(fā)酵培養(yǎng)基配方：山梨醇-0.5％，蛋白胨-1％，NaCl-0.2％，酵母膏-0.2％，羥烯腺嘌呤-0.3g，烯酰腺嘌呤-0.3g，牛肉膏-3g，黃原膠-3g，瓊脂-5g，pH值調(diào)至7.0，清水補齊至1000g；按上述比例配置好所需發(fā)酵培養(yǎng)基的量，然后將菌株于無菌條件下接入液體發(fā)酵培養(yǎng)基中，在34℃條件下于搖床上振蕩培養(yǎng)72小時后，至有效活菌數(shù)均達到2.0×10⁹個/ml制得一級種子；然后將培養(yǎng)好的一級種子按3％的比例，接入裝有按上述比例配好的已經(jīng)滅菌并冷卻后的發(fā)酵罐中進行發(fā)酵生產(chǎn)，發(fā)酵培養(yǎng)溫度34℃，通氣量開始在1∶1(v.v.m)，培養(yǎng)24小時后增至1∶1.2(v.v.m)，48小時后繼續(xù)增至1∶1.5(v.v.m)。發(fā)酵至72小時發(fā)酵完畢，經(jīng)過鏡檢發(fā)酵液中ACCC10700：枯草芽孢桿菌的菌量達到20-30億個/ml時為合格菌液；

(3)制備菌株ACCC40051的發(fā)酵液：液體發(fā)酵培養(yǎng)基配方：20％馬鈴薯汁-1000ml，葡萄糖-20g，KH₂PO₄-3g，MgSO₄·7H₂O-1.5g，硫胺素-0.05g，羥烯腺嘌呤-0.3g，烯酰腺嘌呤-0.3g，黃原膠-3g，瓊脂-5g，pH值調(diào)至6.0；按上述比例配置好所需發(fā)酵培養(yǎng)基的量，然后將菌株于無菌條件下接入液體發(fā)酵培養(yǎng)基中，在30℃條件下于搖床上振蕩培養(yǎng)72小時后，至有效活菌數(shù)均達到2.0×10⁹個/ml制得一級種子；然后將培養(yǎng)好的一級種子按3％的比例，接入裝有按上述比例配好的已經(jīng)滅菌并冷卻后的發(fā)酵罐中進行發(fā)酵生產(chǎn)，發(fā)酵培養(yǎng)溫度30℃，通氣量開始在1∶1(v.v.m)，培養(yǎng)24小時后增至1∶1.2(v.v.m)，48小時后繼續(xù)增至1∶1.5(v.v.m)。發(fā)酵至72小時發(fā)酵完畢，經(jīng)過鏡檢發(fā)酵液中ACCC40051：吸水鏈霉菌井岡變種的菌量達到20-30億個/ml時為合格菌液。

步驟二：生物菌劑的制備

菌株ACCC10620的發(fā)酵液20％，菌株ACCC10700的發(fā)酵液20％，菌株ACCC40051的發(fā)酵液20％，羥烯腺嘌呤0.3％，烯酰腺嘌呤-0.3％，腐植酸鉀10％，海藻酸鉀10％，用少量檸檬酸或碳酸氫鈉將pH值調(diào)節(jié)至7.0，余量用清水補齊后混合攪拌溶解均勻，制得本發(fā)明所述生物菌劑，上述％均為重量百分比。

3.權(quán)利要求1的生物菌劑用于防治棉花枯萎病和棉花黃萎病的用途。