[發明專利]一種豬水泡病病毒VP1 蛋白分泌表達重組質粒及其應用無效
| 申請號： | 201210464946.4 | 申請日： | 2012-11-16 |
| 公開（公告）號： | CN102978227A | 公開（公告）日： | 2013-03-20 |
| 發明（設計）人： | 曹琛福;李中圣;楊俊興;花群義 | 申請（專利權）人： | 深圳出入境檢驗檢疫局動植物檢驗檢疫技術中心 |
| 主分類號： | C12N15/63 | 分類號： | C12N15/63;C12N15/40;C12N15/66;C07K14/08 |
| 代理公司： | 深圳鼎合誠知識產權代理有限公司 44281 | 代理人： | 彭家恩 |
| 地址： | 518045 *** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 種豬 水泡 病毒 vp1 蛋白 分泌 表達 重組 質粒 及其 應用 | ||
1.一種豬水泡病病毒VP1蛋白分泌表達重組質粒，其特征在于：所述重組質粒含有表達豬水泡病病毒VP1蛋白質的基因和蜂毒信號肽基因序列。
2.根據權利要求1所述的重組質粒，其特征在于：所述蜂毒信號肽基因序列含有Seq?ID?No.1所示序列。
3.根據權利要求1所述的重組質粒，其特征在于：所述表達豬水泡病病毒VP1蛋白質的基因含有Seq?ID?No.2所示序列。
4.根據權利要求1-3任一項所述的重組質粒，其特征在于：所述重組質粒以pFastBac?1質粒為載體。
5.一種權利要求4所述重組質粒的構建方法，其特征在于：所述構建方法包括，以pFastBac?1質粒為載體，將所述表達豬水泡病病毒VP1蛋白質的基因和所述蜂毒信號肽基因序列分別插入到pFastBac?1質粒的多克隆位點之間。
6.根據權利要求5所述的構建方法，其特征在于：所述表達豬水泡病病毒VP1蛋白質的基因插入到pFastBac?1質粒的EcoR?I和HindⅢ克隆位點之間；所述蜂毒信號肽基因序列插入到pFastBac?1質粒的BamH?Ⅰ和EcoR?Ⅰ克隆位點之間。
7.一種豬水泡病病毒VP1蛋白分泌表達方法，包括以下步驟：
A.將權利要求1-4任一項所述的重組質粒轉入感受態大腸桿菌DH10Bac中；
B.提取轉座有所述表達豬水泡病病毒VP1蛋白質的基因和所述蜂毒信號肽基因序列的重組Bacmid質粒；
C.以步驟B提取的重組Bacmid質粒轉染昆蟲細胞獲得重組病毒；
D.以步驟C獲得的重組病毒感染昆蟲細胞，培養感染的昆蟲細胞，收獲細胞培養物的上清液，其中即含有豬水泡病病毒VP1蛋白。
8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于：所述昆蟲細胞為sf9昆蟲細胞。
9.根據權利要求7所述的方法，其特征在于：所述步驟C中的轉染采用脂質體法。
10.一種豬水泡病病毒VP1蛋白分泌表達試劑盒，其特征在于：所述試劑盒包含權利要求1-4任一項所述的重組質粒，用以對豬水泡病病毒VP1蛋白進行胞外分泌表達。
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