[發明專利]復制缺陷型沙粒病毒載體

在審

• 申請號: 201210461234.7
• 申請日: 2008-12-22
• 公開（公告）號: CN103255169A
• 公開（公告）日: 2013-08-21
• 發明（設計）人: 丹尼爾·D·平舍韋爾;盧卡斯·弗拉茨;安德烈亞斯·貝格塔勒;羅爾夫·青克納格爾
• 申請（專利權）人: 蘇黎士大學
• 主分類號: C12N15/86
• 分類號: C12N15/86;A61K48/00;A61P31/04;A61P31/12;A61P33/00;A61P37/02;A61P35/00;A61P37/08;A61P3/04;A61P3/10;A61P19/06;A61P25/28;A61P25/16
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 彭鯤鵬;鄭斌

1.一種感染性沙粒病毒顆粒，其被改造成包含能在被感染細胞中擴增和表達其遺傳信息但不能在正常的非基因工程細胞中進一步產生感染性后代顆粒的基因組。

2.根據權利要求1的沙粒病毒顆粒，其包含編碼目的蛋白質或肽的額外的核酸。

3.根據權利要求1的沙粒病毒顆粒，其包含調節宿主基因表達的額外的核酸。

4.根據權利要求2或3的沙粒病毒顆粒，其包含經修飾的基因組，其中：

i)沙粒病毒的四個開放閱讀框即糖蛋白(GP)、核蛋白(NP)、基質蛋白Z和RNA依賴性RNA聚合酶L中的一個或更多個被除去或突變，以阻止在正常細胞中復制，但是仍允許在被沙粒病毒載體感染的細胞中進行基因表達；

ii)使編碼一種或更多種目的蛋白質或調節宿主基因表達的外源核糖核酸在沙粒病毒的四個啟動子即S節段的5’UTR和3’UTR以及L節段的5’UTR和3’UTR之中一個或更多個的控制下進行表達，和/或在可被病毒RNA依賴性RNA聚合酶、細胞RNA聚合酶I、RNA聚合酶II或RNA聚合酶III讀出的調控元件的控制下進行表達，其可自身進行表達或者通過與沙粒病毒蛋白質開放閱讀框融合而被通讀；以及任選地

iii)引入一個或者多個內部核糖體進入位點來增強目的蛋白質在被沙粒病毒感染的細胞中的表達。

5.根據權利要求4的沙粒病毒顆粒，其中所述沙粒病毒的開放閱讀框糖蛋白(GP)被除去或突變。

6.根據權利要求5的沙粒病毒顆粒，其中所述沙粒病毒顆粒的開放閱讀框糖蛋白(GP)被除去，并且替換成編碼一種或多種目的蛋白質或者調節宿主基因表達的外源核糖核酸。

7.根據權利要求5的沙粒病毒顆粒，其中所述沙粒病毒顆粒的開放閱讀框糖蛋白(GP)被除去，并且替換成編碼來自感染性生物、腫瘤或變應原的肽或蛋白質抗原的外源核糖核酸。

8.根據權利要求5的沙粒病毒顆粒，其中所述沙粒病毒顆粒的開放閱讀框糖蛋白(GP)被除去，并且替換成選自短發夾RNA(shRNA)、小干擾RNA(siRNA)和微RNA(miRNA)的外源核糖核酸。

9.根據權利要求1至8中任一項的沙粒病毒顆粒，其中所述沙粒病毒顆粒是淋巴細胞脈絡叢腦膜炎病毒(LCMV)。

10.根據權利要求9的沙粒病毒顆粒，其包含編碼抗原的外源核糖核酸，所述抗原選自呼吸道合胞體病毒抗原、人免疫缺陷病毒抗原、丙型肝炎病毒抗原、帶狀皰疹病毒抗原、單純皰疹病毒抗原、巨細胞病毒抗原和來自結核分枝桿菌的抗原。

11.疫苗或藥物制劑，其包含根據權利要求2至10中任一項的沙粒病毒顆粒。

12.預防患者中由病毒、細菌、寄生蟲和朊病毒所致感染的方法，其包括向有此需求的患者施用治療有效量的根據權利要求2至10中任一項所述沙粒病毒顆粒。

13.治療患者中由病毒、細菌、寄生蟲和朊病毒所致感染、自身免疫疾病、腫瘤疾病、代謝疾病、退行性疾病、遺傳病、變應性疾病或物質依賴的方法，其包括向有此需求的患者施用治療有效量的根據權利要求2至10中任一項所述沙粒病毒顆粒。

14.在細胞培養物中表達目的蛋白質或修飾基因表達的方法，其中利用根據權利要求2至10中任一項所述沙粒病毒顆粒感染所述細胞培養物。