[發明專利]葡萄球菌腸毒素C化學發光酶聯免疫分析檢測試劑盒

有效

• 申請號: 201210458261.9
• 申請日: 2012-11-14
• 公開（公告）號: CN102944678A
• 公開（公告）日: 2013-02-27
• 發明（設計）人: 李琦;劉志佳;黃業青;楊琨;張春梅;宋朝君;李永明;徐竹蔚;劉飛;陳麗華;張赟;方亮;孫元杰;易靜;周幸春;馬櫻;劉蓓;張宇絲;劉蓉蓉;金伯泉
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第四軍醫大學
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N21/76
• 代理公司: 西安恒泰知識產權代理事務所 61216
• 代理人: 李鄭建

技術領域

本發明屬于免疫分析技術領域，涉及一種超抗原檢測的試劑盒，特別是一種葡萄球菌腸毒素C化學發光酶聯免疫分析檢測試劑盒，該試劑盒利用雙抗體夾心化學發光酶聯免疫分析法來定量檢測食品中尤其是牛奶中的金黃色葡萄球菌腸毒素C含量。

背景技術

食品安全與人類健康密切相關，食品安全問題已成為社會關注的熱點問題。借助于免疫學技術的發展，構建完善的食源性疾病監控體系，實施全方位的食品安全監控，將有助于提髙食品工業的產品質量，從而保障公眾的健康。

金黃色葡萄球菌是一種人畜共患病的重要致病菌，該菌廣泛存在于空氣、水、塵埃及人和動物等溫血動物的皮膚和鼻腔中。金黃色葡萄球菌腸毒素(staphylococcal?enterotoxins，SEs)是由金黃色葡萄球菌（Staphylococcus.aureus）產生的細菌性外毒素。依據SEs的血清型不同，可分為SEA到SEIV等23個血清型，其中SEA到SEI以及SER、SES和SET具有引起以嘔吐為主要癥狀的中毒。SEs可溶于水，具有很強的熱穩定性，被金黃色葡萄球菌污染的食物經過加熱處理后，即使細菌被殺死，其產生的SE仍然具有生物活性。同時SEs可抵抗外源性蛋白酶比如胃蛋白酶及胰蛋白酶的消化作用，一旦攝入，可引發中毒。據歐洲食品安全委員會統計報告，由SEs引起的食物中毒約占總發病例數的4.1%，但由于檢驗方法缺乏較好的靈敏度，比例被嚴重低估。美國疾病預防控制中心報告，由金黃色葡萄球菌引起的食物中毒僅次于大腸埃希菌，居第二位，占細菌性食物中毒的33％。加拿大報告的發生率更高，占細菌性食物中毒的45％。我國每年發生此類中毒事件也非常多，全國各地均有報告，是疾病預防控制部門重點監測的疾病之一。絕大多數的牛皮毛和粘膜中攜帶有大量的金黃色葡萄球菌，人手皮膚也常攜帶有金黃色葡萄球菌，在食品生產中，這些細菌可在烹調不當的食物中大量繁殖并產生SEs。因此，在食品衛生檢測中，SEs的檢出是確定食物是被金黃色葡萄球菌污染的決定因素。由于SEs分子量較小（22-kDa到29-kDa），難以與食物蛋白相區分，檢測主要依賴于免疫學檢測方法，比如酶聯免疫吸附法（Enzyme-linked?immunosorbent?assay，ELISA）。

牛乳腺炎是嚴重影響乳品質量的多發病，流行病學調查顯示，其發病率可高達56.5%，其中金黃色葡萄球菌是牛乳腺炎主要的致病菌。據國外文獻報道，從患有隱性感染或有癥狀乳腺炎的牛乳腺分泌物中，均可檢出多種金黃色葡萄球菌腸毒素，其中以檢測到金黃色葡萄球菌腸毒素C最為常見，且濃度與牛乳腺炎嚴重程度相關。因此，對牛奶等進行金黃色葡萄球菌腸毒素C等毒素的檢測，對食品安全具有十分重要的意義，開發靈敏的檢測和定量手段，可以做為食品安全監控的重要手段。

金黃色葡萄球菌腸毒素C中毒劑量極低，僅需ng水平即可引起明顯中毒癥狀。目前，檢測金黃色葡萄球菌腸毒素C主要通過免疫學方法，有免疫瓊脂擴散法、反向間接血凝法、免疫芯片法和酶聯免疫吸附法等。免疫瓊脂擴散法和反向間接血凝法的缺點是費時、影響分析的干擾因素較多、靈敏度低，特異性差。免疫芯片法存在價格昂貴，操作人員需要經過專業培訓，影響分析的干擾因素較多，靈敏度低等不足。酶聯免疫吸附法雖然操作簡便，適合大通量檢測，但是檢測敏感性較差。

鑒于此，建立一種葡萄球菌腸毒素C化學發光酶聯免疫分析檢測試劑盒，對于在食品中快速、特異、靈敏的檢測金黃色葡萄球菌腸毒素C具有重要意義。

發明內容

本發明的目的在于，提供一種葡萄球菌腸毒素C化學發光酶聯免疫分析檢測試劑盒，該試劑盒具備了酶聯免疫法的特異性強、重復性好便于大通量檢測的特點，同時還具有極高的靈敏度，非常適合于快速定量食品特別是牛奶中的金黃色葡萄球菌腸毒素C。

為了實現上述任務，本發明采取如下的技術解決方案：

一種葡萄球菌腸毒素C化學發光酶聯免疫分析檢測試劑盒，其特征在于，該試劑盒的內容物包括有：抗金黃色葡萄球菌腸毒素C的單克隆抗體，辣根過氧化酶標記的抗金黃色葡萄球菌腸毒素C檢測抗體溶液，金黃色葡萄球菌腸毒素C系列標準溶液，包被溶液、封閉溶液、洗滌液、化學發光液，以及化學發光酶聯板，其中：

所述化學發光酶聯免疫板的各孔包被有抗金黃色葡萄球菌腸毒素C的單克隆抗體；其中所述包被抗體濃度優選2.5μg/mL。

所述辣根過氧化酶標記的抗金黃色葡萄球菌腸毒素C檢測抗體溶液，是由辣根過氧化酶標記的小鼠抗金黃色葡萄球菌腸毒素C單克隆抗體；使用時用封閉溶液配制成1:16000的工作濃度；