[發明專利]一種從獼猴桃葉片中提取RNA的方法有效
| 申請號： | 201210449428.5 | 申請日： | 2012-11-12 |
| 公開（公告）號： | CN102899319A | 公開（公告）日： | 2013-01-30 |
| 發明（設計）人： | 田宏現;彭司英 | 申請（專利權）人： | 吉首大學 |
| 主分類號： | C12N15/10 | 分類號： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 416000 湖南省湘西*** | 國省代碼： | 湖南;43 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 獼猴桃 葉片 提取 rna 方法 | ||
1.一種獼猴桃葉片中RNA的提取方法，其特征在于包含以下幾個步驟：
（1）獼猴桃葉片的前處理。將剛摘取的獼猴桃葉片剪碎后，立即投入質量分數為2％－4％的異硫氰酸胍的50％－80％的乙醇溶液中，獼猴桃葉片與溶液的質量體積比為1：50－1：200，常溫下浸提1－3小時。
（2）獼猴桃總RNA的提取。將RNA提取緩沖液于55－75℃水浴鍋中溫育30?-40分鐘，立即取上述處理的葉片加緩沖液于研缽中快速研磨（葉片與緩沖液的質量體積比為1：10－1：30）。把研磨好的，成粘稠狀的勻漿液移入離心管中，55－75℃溫育5－15?分鐘，加入等體積的氯仿和異戊醇的混合溶液（混合溶液中氯仿和異戊醇的體積比為20?:?1－30：1），上下劇烈震蕩10-90秒，然后于0－20℃、5000－20000?g，離心5－60分鐘。取上清，重復上述抽提步驟2－4次。取上清，加入上清液1/5－1/2體積的5－15M?LiCl溶液并混勻，-10℃－-50℃條件下放置10-20?小時，使RNA沉淀。0－20℃、5000－20000?g，離心5－60分鐘，棄上清，獲粗提的總RNA沉淀。
（3）獼猴桃RNA的純化。加入DEPC處理過的水溶解上述得到的總RNA（水與總RNA的體積質量比為5:1-20:1），再加入DEPC處理過的水1/30－1/3體積的1－10?M?NaAc，1－10體積的90?%－98％的乙醇。置于-5℃－-50℃，1-5小時，使RNA沉淀。0－20℃，5000－20000?g，離心5－60分鐘，棄上清，用50%－95％乙醇清洗沉淀，空氣中干燥后即得RNA。
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