[發明專利]一種通過幼苗誘導的愈傷對玉米進行基因轉化的方法

在審

• 申請號: 201210441697.7
• 申請日: 2012-11-08
• 公開（公告）號: CN102911964A
• 公開（公告）日: 2013-02-06
• 發明（設計）人: 曹言勇;李會勇;李晶晶;王利鋒;張永輝;王浩
• 申請（專利權）人: 河南省農業科學院
• 主分類號: C12N15/82
• 分類號: C12N15/82;A01H5/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種通過幼苗誘導的愈傷對玉米進行基因轉化的方法，該方法包括以下步驟：

(1)玉米種子的消毒、萌發；

(2)胚性愈傷的誘導與繼代；

(3)制備侵染用農桿菌菌液并侵染胚性愈傷；

(4)侵染后的恢復；

(5)抗性愈傷的篩選；

(6)篩選后恢復、誘導；

(7)抗性愈傷分化；

(8)轉化苗生根培養；

(9)轉化苗移栽。

2.如權利要求1所述的通過幼苗誘導的愈傷對玉米進行基因轉化的方法，其特征在于：農桿菌菌液侵染胚性愈傷的過程為：取生長良好的胚性愈傷組織，加入含乙酰丁香酮的侵染培養基，黑暗中放置1h，吸去侵染培養基，加入農桿菌菌液，上下顛倒1min，黑暗處放置10min，吸去菌液，將侵染過的愈傷組織轉移到滅過菌的5層濾紙上，待愈傷上的菌液被完全吸凈后，將侵染后的愈傷轉移到共培養培養基上，培養基用封口膜封口后于25℃、黑暗條件下共培養3d。

3.如權利要求1所述的通過幼苗誘導的愈傷對玉米進行基因轉化的方法，其特征在于：侵染后的恢復過程為把共培養3d后的愈傷組織，依次用含有250mg/l噻孢霉素的無菌蒸餾水、無菌蒸餾水洗滌2次，用無菌的濾紙吸凈培養基上殘留的水分，轉入到恢復培養基上，封口后于25℃、黑暗條件下恢復培養7d。

3.如權利要求1所述的通過幼苗誘導的愈傷對玉米進行基因轉化的方法，其特征在于抗性愈傷的篩選過程為：侵染后的愈傷在恢復培養基上培養7d后，轉移到篩選培養基上，在28℃、黑暗條件下培養，每14d為1個篩選周期，更換一次篩選培養基，其中AgNO₃間隔添加，篩選期間，對于愈傷變褐的部分要及時切除。

4.如權利要求1所述的通過幼苗誘導的愈傷對玉米進行基因轉化的方法，其特征在于篩選后恢復、誘導過程為：篩選結束后，剔除嚴重水漬化、發黑、發褐的愈傷組織，將抗性愈傷組織轉移到篩后恢復培養基上，在28℃、黑暗條件下培養14d，將恢復14d的所有抗性愈傷組織轉移到篩后誘導培養基，在28℃、黑暗條件下培養14d。