[發明專利]一種具有免疫活性的多肽衍生物及其內參抗體的制備方法和應用

有效

• 申請號: 201210438803.6
• 申請日: 2012-11-06
• 公開（公告）號: CN102993276A
• 公開（公告）日: 2013-03-27
• 發明（設計）人: 姬志娟;鄔曉樂;鄔江;張波;張軍龍;張春玲;張婉婷;薛金蓮;沈向陽;喬國明
• 申請（專利權）人: 北京博奧森生物技術有限公司
• 主分類號: C07K14/00
• 分類號: C07K14/00;C07K1/20;C07K1/06;C07K1/04;C07K16/00
• 代理公司: 北京市商泰律師事務所 11255
• 代理人: 毛燕生

1.一種具有免疫活性的多肽衍生物，所述多肽衍生物具有下列序列結構：R₈(Kys)₄-(Lys)₂-Lys-Gly，其中，R表示多肽片段，其序列為：YDESGPSIVHRKCF-GSK。

2.一種具有免疫活性的多肽衍生物及其內參抗體的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

a）提供9-芴基甲氧羰酰基保護的氨基酸（Fmoc-AA）并使其活化，得到活化氨基酸；

b）將所述活化氨基酸與P-羥甲基苯氧甲基多聚乙烯樹脂（HMP樹脂）反應，得到連接有氨基酸的樹脂；

c）脫除所述連接有氨基酸的樹脂的Fmoc保護基；

d）將脫除Fmoc保護基的連接有氨基酸的樹脂與過量的活化羧基組份偶聯，并脫去偶聯后活化氨基組份的氨基保護基；

e）重復步驟d）至脫去偶聯后活化氨基組份的氨基保護基的數目為8，得到八分支活化氨基組份骨架；

f）將所述八分支活化氨基組份骨架同時連接8個相同的多肽，得到肽樹脂，將所述肽樹脂分離提純，得到具有免疫活性的多肽衍生物。

3.根據權利要求2所述的具有免疫活性的多肽衍生物及其內參抗體的制備方法，其特征在于，在步驟a）中，所述Fmoc-AA通過與人多巴胺脫羧酶（DDC）和羥基苯并三唑（HOBT）反應活化。

4.根據權利要求2所述的具有免疫活性的多肽衍生物及其內參抗體的制備方法，其特征在于，所述活化氨基組份為賴氨酸。

5.根據權利要求2所述的具有免疫活性的多肽衍生物及其內參抗體的制備方法，其特征在于，所述多肽為YDESGPSIVHRKCF-GSK。

6.根據權利要求2所述的具有免疫活性的多肽衍生物及其內參抗體的制備方法，其特征在于，步驟f）包括：

f-1）用三氟乙酸(TFA)結合清除劑與所述肽樹脂反應，以將所述具有免疫活性的多肽衍生物從肽樹脂上分離；

f-2）反應后去除清除劑，并用萃取液萃取，得到具有免疫活性的多肽衍生物粗品；

f-3）將具有免疫活性的多肽衍生物粗品進行純化，得到具有免疫活性的多肽衍生物。

7.根據權利要求6所述的具有免疫活性的多肽衍生物及其內參抗體的制備方法，其特征在于，所述清除劑為1，2-乙二硫醇（EDT）、硫代苯甲醚和水的混合溶液，步驟f-1）的反應時間為3h。

8.根據權利要求6所述的具有免疫活性的多肽衍生物及其內參抗體的制備方法，其特征在于，所述萃取液為乙醚。

9.根據權利要求6所述的具有免疫活性的多肽衍生物及其內參抗體的制備方法，其特征在于，所述步驟f-3）的純化采用高效液相色譜分離純化。

10.一種具有免疫活性的多肽衍生物在制備抗體中的應用。