[發明專利]檢測齊帕特羅的化學發光免疫檢測試劑盒

無效

• 申請號: 201210438102.2
• 申請日: 2012-11-06
• 公開（公告）號: CN103808933A
• 公開（公告）日: 2014-05-21
• 發明（設計）人: 杜道林;洪霞
• 申請（專利權）人: 江蘇維賽科技生物發展有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/566;G01N21/76
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技術領域

本發明涉及一種檢測齊帕特羅的化學發光免疫檢測試劑盒，用于檢測動物源性食品中如動物組織、內臟、血液、尿液和飼料、飼料原料中的齊帕特羅含量或殘留量。屬于免疫學檢測領域。?

背景技術

用?β₂-腎上腺素受體激動劑能增加肌肉/脂肪比，可明顯提高飼養動物瘦肉率。但大量使用或長期超量使用，且不遵守安全停藥期，則會在飼養動物組織中蓄積，人食用了這種動物組織后會引起中毒甚至死亡，因此很多國家和國際組織已經禁止這類化合物用于食品動物飼養。運動員大劑量使用該類藥物，可以增加肌肉/脂肪比并提高肌肉力量，還對呼吸系統和神經系統有興奮作用，可以在比賽中瞬間爆發，獲得超常水平的發揮，有違公平競賽的原則，?所以國際奧委會明令禁止參賽運動員使用此類藥物。?

齊帕特羅(Zilpaterol)是一種新型β₂?-腎上腺素能激動劑，其化學結構?(見式?1)與常見的苯胺類-腎上腺素類激動劑(克侖特羅和沙丁胺醇)和苯酚類β?-腎上腺素類激動劑?(萊克多巴胺)是完全不同的，它的作用效果相當于克侖特羅的十分之一，但比萊克多巴胺更有效。在墨西哥和南非齊帕特羅被允許作為宰殺期牛的飼料添加劑使用，但是在歐盟被明令禁止使用。?

式?1?齊帕特羅的化學結構?

目前，歐盟國家對齊帕特羅使用和動物組織中殘留方面的研究較多實驗方法涉及氣相色譜-質譜聯用法、高效液相色譜-串聯質譜法等。氣質聯用法均需要對樣品進行衍生，?操作步驟多，實驗時間長，而高效液相色譜-串連質譜法對儀器設備要求高，通常需要利用氘代內標物質，實驗步驟較復雜。酶聯免疫吸附分析法(ELISA)是當前應用最廣的檢測技術之一，主要優點在于檢測速度快，樣品前處理簡單，操作簡單，檢測成本低，同時便于用于大批量樣品的檢測。

化學發光免疫檢測技術是化學發光法和免疫分析法結合的產物，因此同時具有化學發光檢測技術的高靈敏性和免疫分析技術的高特異性。本發明通過特有的免疫動物制備具有高親和力、高特異性的齊帕特羅抗體，并采用酶標記抗體，建立一種可以檢測齊帕特羅的化學發光免疫試劑盒。本方法具有操作簡便、快捷，靈敏度高、特異性好等特點。?

發明內容

針對現有技術中存在的問題，本發明主要是利用抗原與抗體的特異性免疫反應的基本原理來實現的。化學發光免疫分析是化學發光法和免疫分析法結合的產物，因此同時具有化學發光法的高靈敏度和免疫分析法的高特異性。在整個反應過程中，樣品中齊帕特羅含量越高，反應體系中發光強度越弱；反之，樣品中齊帕特羅含量越少，發光強度越高。?

本發明是一種檢測齊帕特羅的化學發光免疫檢測試劑盒，其特征在于含有以下成份：?

1、包被有齊帕特羅-載體蛋白偶聯物的不透明白色酶標板；所述齊帕特羅-載體蛋白偶聯物是將齊帕特羅與載體蛋白通過混合酸酐法或碳二亞胺法偶聯得到，所述載體蛋白為人血清白蛋白、牛血清白蛋白、雞蛋白蛋白、鼠血清蛋白或兔血清蛋白；

2、齊帕特羅標準品；

3、齊帕特羅-過氧化物酶標記抗體：該成分為用過氧化物酶標記的齊帕特羅抗體，所述齊帕特羅抗體為單克隆抗體或多克隆抗體；

4、發光底物液：該發光底物液是以魯米諾貨異魯米諾為發光劑的化學發光底物液，分為A液和B液保存，在使用前按1:1混合使用；其中A液位發光增強劑加魯米諾貨發光增強劑加異魯米諾，B液為過氧化氫溶液或尿素過氧化氫溶液；

5、2倍濃縮稀釋液；

6、20倍濃縮洗滌液；

本發明中，所述的不透明白色酶標板為96孔的可拆卸或不可拆卸的不透明白色酶標板。?

本發明中，所述的齊帕特羅標準品，由一系列不同濃度的齊帕特羅標準品組成，濃度為0.01~16.0?μg/L的濃度區間。?

本發明中，所述的齊帕特羅-過氧化物酶標記抗體為用過氧化物酶標記的齊帕特羅抗體，如辣根過氧化物酶(HRP)標記的齊帕特羅抗體。?

本發明中，所述的發光底物液為商品化的任一種以魯米諾貨異魯米諾為發光劑的化學發光底物液。?

本發明中，所述所述2倍濃縮稀釋液，其成分為0.01mol/L，pH7.4的磷酸緩沖液、甘氨酸-HCl緩沖液或Tris-HCl緩沖液，使用前請按1：1稀釋（1份濃縮樣品稀釋液+1份去離子水）。?

本發明中，所述20倍濃縮洗滌液，其包含0.05%吐溫-20，0.01mol/L的PBST，pH值范圍7.0-7.5之間，使用前請按1：19稀釋（1份濃縮稀釋液+19份去離子水）。?