[發(fā)明專利]用于鑒定小麥春化基因VRN-1的引物對(duì)組及其應(yīng)用

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210436963.7
• 申請(qǐng)日: 2012-11-05
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102912027A
• 公開(kāi)（公告）日: 2013-02-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 穆培源;張曉科;相吉山;張影全;桑偉;徐紅軍;韓新年;聶迎彬;崔鳳娟;鄒波
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 新疆農(nóng)墾科學(xué)院
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68;C12N15/11;A01H1/04;A01H1/02
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 關(guān)暢;任鳳華

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種用于鑒定或輔助鑒定小麥春化基因VRN-1的引物對(duì)組及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

春化階段是小麥生長(zhǎng)發(fā)育的基本階段之一。小麥的春化反應(yīng)與其生育期及適應(yīng)性密切相關(guān)，是指導(dǎo)小麥區(qū)劃和新品種推廣的主要依據(jù)之一，受春化基因控制。春化基因決定小麥全生育周期長(zhǎng)短的70~75%。Iwaki和Van?Beem等研究表明，世界不同地區(qū)小麥品種的春化基因組成存在差異，反映了不同生態(tài)類型對(duì)品種春化反應(yīng)的要求不同。

春化基因VRN-1編碼的蛋白為MADS-box轉(zhuǎn)錄因子，受低溫誘導(dǎo)促進(jìn)開(kāi)花，是普通小麥春化作用的一類主要基因，包括3個(gè)位點(diǎn)VRN-A1、VRN-B1和VRN-D1，分別位于5A、5B和5D染色體長(zhǎng)臂上。3個(gè)基因位點(diǎn)不同的等位變異對(duì)春化作用的效應(yīng)不同，顯性等位變異Vm-A1的效應(yīng)最強(qiáng)，表現(xiàn)為對(duì)春化作用高度不敏感，同時(shí)對(duì)Vrn-B1和Vrn-D1位點(diǎn)基因具有上位性效應(yīng)；顯性等位變異Vrn-B1和Vrn-D1對(duì)春化作用的敏感性較弱，兩者之間未發(fā)現(xiàn)彼此間的上位作用。Yan和Fu等發(fā)現(xiàn)，VRN-1春化基因變異類型受其啟動(dòng)子區(qū)和第一個(gè)內(nèi)含子區(qū)決定。在普通小麥中，VRN-A1位點(diǎn)有4種變異類型，分別為Vrn-A1a、Vrn-A1b、Vrn-A1c和vrn-A1，其中Vrn-A1a、Vrn-A1b和Vrn-A1c表現(xiàn)為顯性，vrn-A1為隱性；VRN-B1和VRN-D1位點(diǎn)一般通常存在兩種等位變異類型，即顯性和隱性等位變異。與隱性等位變異類型相比，顯性等位變異Vrn-A1a和Vrn-A1b分別在啟動(dòng)子區(qū)域插入和缺失了一定數(shù)量的堿基序列，而顯性Vrn-A1c、Vrn-B1和Vrn-D1在第一個(gè)內(nèi)含子序列出現(xiàn)了大片段堿基的缺失。

在普通小麥中，VRN-A1位點(diǎn)存在4種等位變異，需要用3對(duì)引物分別進(jìn)行3次PCR檢測(cè)；VRN-B1和VRN-D1位點(diǎn)兩種等位變異，需要用兩對(duì)引物分別進(jìn)行兩次PCR檢測(cè)。為此，檢測(cè)1個(gè)小麥材料春化基因VRN-1的3個(gè)位點(diǎn)等位變異組成，需要連續(xù)進(jìn)行7次PCR檢測(cè)，檢測(cè)程序繁瑣，實(shí)驗(yàn)成本高。

多重PCR這一概念自1988年由Chambercian等提出后，由于其快速、高效、低成本等一系列的優(yōu)點(diǎn)，使得這項(xiàng)技術(shù)在生命科學(xué)領(lǐng)域得到了廣泛的應(yīng)用，如植物種質(zhì)純度鑒定、植物分子育種、植物病蟲(chóng)害檢測(cè)等。利用多重PCR技術(shù)，在同一個(gè)PCR反應(yīng)體系中加入兩對(duì)或兩對(duì)以上特異性引物進(jìn)行擴(kuò)增，可以同時(shí)檢測(cè)出多個(gè)等位變異類型，降低檢測(cè)成本，提高效益。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供用于鑒定或輔助鑒定待測(cè)小麥春化基因的多重PCR引物對(duì)組、試劑盒，以及利用所述多重PCR引物對(duì)組鑒定或輔助鑒定待測(cè)小麥春化基因的方法。

本發(fā)明所提供的用于鑒定或輔助鑒定待測(cè)小麥春化基因的多重PCR引物對(duì)組，由引物對(duì)組A、引物對(duì)組B和引物對(duì)組C組成；所述引物對(duì)組A由特異于所述VRN-A1基因的兩個(gè)引物對(duì)組成；所述引物對(duì)組B由特異于所述VRN-B1基因的兩個(gè)引物對(duì)組成；所述引物對(duì)組C由特異于所述VRN-D1基因的兩個(gè)引物對(duì)組成；

所述引物對(duì)組A中，所述特異于VRN-A1基因的兩個(gè)引物對(duì)分別為序列表中序列1和序列2所示的兩條單鏈DNA組成的引物對(duì)1，以及序列3和序列4所示的兩條單鏈DNA組成的引物對(duì)2；

所述引物對(duì)組B中，所述特異于VRN-B1基因的兩個(gè)引物對(duì)分別為序列表中序列5和序列6所示的兩條單鏈DNA組成的引物對(duì)3，以及序列5和序列7所示的兩條單鏈DNA組成的引物對(duì)4；

所述引物對(duì)組C中，所述特異于VRN-D1基因的兩個(gè)引物對(duì)分別為序列表中序列8和序列9所示的兩條單鏈DNA組成的引物對(duì)5，以及序列8和序列10所示的兩條單鏈DNA組成的引物對(duì)6。

其中，序列1由20個(gè)核苷酸組成；序列2由20個(gè)核苷酸組成；序列3由20個(gè)核苷酸組成；序列4由20個(gè)核苷酸組成；序列5由20個(gè)核苷酸組成；序列6由23個(gè)核苷酸組成；序列7由22個(gè)核苷酸組成；序列8由21個(gè)核苷酸組成；序列9由19個(gè)核苷酸組成；序列10由21個(gè)核苷酸組成。

本發(fā)明中，所述VRN-A1基因有四個(gè)等位基因，分別是Vrn-A1a、Vrn-A1b、Vrn-A1c和vrn-A1（前三個(gè)表現(xiàn)為顯性，最后一個(gè)表現(xiàn)為隱性）；所述VRN-B1基因有兩個(gè)等位基因，分別是Vrn-B1和vrn-B1（前一個(gè)表現(xiàn)為顯性，后一個(gè)表現(xiàn)為隱性）；所述VRN-D1基因有兩個(gè)等位基因，分別是Vrn-D1和vrn-D1（前一個(gè)表現(xiàn)為顯性，后一個(gè)表現(xiàn)為隱性）。