[發(fā)明專利]一種粘桿菌素菌種篩選方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210436791.3
• 申請日: 2012-11-06
• 公開（公告）號: CN103060227A
• 公開（公告）日: 2013-04-24
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李琪;劉聰潔;王繪磚
• 申請（專利權(quán)）人: 河北圣雪大成制藥有限責(zé)任公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12Q1/04;C12R1/07
• 代理公司: 石家莊國域?qū)＠虡?biāo)事務(wù)所有限公司 13112
• 代理人: 白海靜

1.一種粘桿菌素菌種篩選方法，包括將多粘芽孢桿菌（Bacillus?colistinus）加到含有L-天門冬氨酸的固體培養(yǎng)基中，單菌落成熟后傳斜面保存，同時接入發(fā)酵培養(yǎng)基中，培養(yǎng)成熟后離心，取上清加入指示菌菌液中培養(yǎng)，制成被檢測樣品，檢測被檢測樣品的吸光度，選擇吸光度低的菌株保藏留用。

2.一種多粘菌素菌種篩選方法，其特征在它包括以下步驟：

a、固體培養(yǎng)：將多粘芽孢桿菌稀釋至10^-3-10^-6個/mL，取0.2?mL涂布到含有0.2mg/mL的L-天門冬氨酸的固體培養(yǎng)基中，于28℃-37℃，40%-60%濕度條件下培養(yǎng)72-100?h；所述固體培養(yǎng)基由質(zhì)量比為0.2mg/mL?L-天門冬氨酸、1%-3%葡萄糖、1%-3%酵母膏、0.1%-0.5%蛋白胨、0.1%-0.5%氯化鈉、2.2%瓊脂、余量為水的組分組成，pH6.0-7.0；

b、斜面培養(yǎng)：在含有L-天門冬氨酸的固體培養(yǎng)基上挑取外形規(guī)則的單菌落，劃線涂布于斜面培養(yǎng)基上，于28℃-37℃，40%-60%濕度條件下培養(yǎng)72-100?h；所述斜面培養(yǎng)基的成分與a步驟中的固體培養(yǎng)基成分相同；

c、發(fā)酵培養(yǎng)：將斜面培養(yǎng)基上成熟的斜面菌苔用接種針轉(zhuǎn)接于發(fā)酵培養(yǎng)基中，于28℃-37℃，200?rpm條件下震蕩培養(yǎng)72-96?h，離心，得發(fā)酵上清液；所述發(fā)酵培養(yǎng)基由3%-5%豆粕粉、1%-3%硫酸銨、0.05-0.10%磷酸二氫鉀、0.01%-0.07%七水硫酸亞鐵、余量為水的組分組成，pH6.0-7.0；

d、制備指示菌菌液：取-80℃保存的大腸桿菌于37℃-38℃水浴快速化凍，按照2%-3%的接種量接種于LB培養(yǎng)基中；所述LB培養(yǎng)基由質(zhì)量比為0.5%酵母提取物，1%胰蛋白胨，1%氯化鈉、余量為水的組分組成，pH7.0-7.2；

e、制備被檢測樣品：取c步所制發(fā)酵上清液30-50?μL加入250-270?μL?d步所制指示菌菌液中，于37℃，200?rpm條件下用?96孔板震蕩培養(yǎng)2-3?h；

f、高產(chǎn)菌株篩選：取被檢測樣品200?μL至96孔酶標(biāo)板中，采用酶標(biāo)儀進行吸光度檢測，選擇吸光值最低的菌株進行保藏留用。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述多粘菌素菌種篩選方法，其特征在于所采用的酶標(biāo)儀，其濾光片波長設(shè)置在660?nm進行吸光度檢測。