[發明專利]小分子干擾核糖核酸的殼聚糖納米粒傳遞系統及制備方法

有效

• 申請號: 201210434863.0
• 申請日: 2012-11-02
• 公開（公告）號: CN102908315A
• 公開（公告）日: 2013-02-06
• 發明（設計）人: 吳聞哲;侯惠民;姚孝林;謝佳雯;徐曉寒
• 申請（專利權）人: 上?，F代藥物制劑工程研究中心有限公司
• 主分類號: A61K9/14
• 分類號: A61K9/14;A61K9/19;A61K48/00;A61K47/36;A61P35/00
• 代理公司: 上海金盛協力知識產權代理有限公司 31242
• 代理人: 羅大忱

技術領域

本發明涉及醫藥領域，具體為一種用于治療鼻咽癌的經鼻給藥小核酸納米載體遞藥系統的制備方法。

背景技術

鼻咽癌(nasopharyngeal?carcinoma,NPC)是我國常見的惡性腫瘤之一,占頭頸部腫瘤發病率首位。好發于兩廣、福建及嘉陵江流域,近年來發病率有逐年升高的趨勢。放射治療是鼻咽癌的基本治療手段,可以取得較高的局部控制率,但由于鼻咽癌生長迅速以及高轉移性,使該病存在著較高的治療失敗率,主要原因是局部區域復發和遠處轉移。是否能夠將基因治療應用于鼻咽癌，是人們十分關注的問題。

小干擾RNA(siRNA)由21～23個堿基對構成,可在細胞質中特異性結合與其堿基對互補的信使RNA(mRNA),經核酸酶降解mRNA而阻斷其編碼蛋白質的表達,即通過RNA干擾(RNAi)實現基因沉默。該過程既可沉默細胞內有害基因,又可沉默外來病毒基因,因此,siRNA作為藥物在癌癥和流感、肝炎等病毒感染疾病治療領域有重要科學意義和應用價值。但是,親水性陰離子siRNA易被快速從血液循環中清除,難以跨越表面負電的疏水性細胞膜,易被核酸酶降解,需要安全高效的載體釋放系統保護并高效運送進入細胞發揮功能。

目前siRNA的非病毒載體主要為陽離子脂質體和陽離子高分子,如聚乙烯亞胺(PEI)和殼聚糖。盡管脂質體易與細胞膜融合,但不穩定且有較強細胞和體內毒性;PEI質子緩沖能力利于胞內轉運,但也有較強的細胞和體內毒性。

殼聚糖(Chitosan,CS)是一種從蝦皮、蟹殼中提取出來的天然高分子多糖,殼聚糖作為天然陽離子多糖,分子鏈上氨基質子化后易黏附并跨越表面負電的疏水性細胞膜,已被證明具有良好的生物相容性、生物可降解性和低/無毒性,因而CS是一種極具發展前景的基因載體材料。

文獻：HOWARD?KA,RAH?BEK?UL,L?IU?X,et?al.RNA?in?terference?in?vi?tro?and?in?vivo?using?a?ch?itosan/s?iRNA?n?anopart?icle?system[J].MolTher,2006,14(4):476-484.報導，Howard等制備了siRNA殼聚糖納米粒，在體外通過熒光顯微鏡觀察到在1h內siRNA殼聚糖納米粒被小鼠胚胎成纖維細胞NIH?3T3細胞攝取,人肺癌細胞H?1299和鼠腹膜巨噬細胞檢測結果顯示,4h后由納米粒介導的基因沉默所引起的綠色熒光蛋白(GFP)表達分別減少77.9%和90%,而市售轉染劑TransIT2TKO作用24h才能達到類似效果。原因可能是小粒徑(180~330nm)和多余的正電荷有利于納米粒與細胞膜的相互作用。

鼻腔給藥試驗表明，與錯排siRNA的對照組和空白組相比,轉基因小鼠細支氣管上皮細胞EGFP表達分別降低37%和43%。

目前siRNA的殼聚糖納米粒傳遞系統研究很多，但是大部分都是基于靜脈注射給藥的傳遞系統，不適用于鼻咽部位給藥。

發明內容

本發明的目的在于提供一種小分子干擾核糖核酸殼聚糖納米粒傳遞系統及制備方法，以克服現有技術存在的缺陷，滿足臨床應用的需要。

所述的小分子干擾核糖核酸殼聚糖納米粒傳遞系統，以殼聚糖為傳遞主體，以所述傳遞系統的總重量為基準，含有0.5~2.0%的小分子干擾核糖核酸和10%～25%的多聚磷酸鈉；

優選的，所述的小分子干擾核糖核酸殼聚糖納米粒傳遞系統，以殼聚糖為傳遞主體，含有1.0～1.5%的小分子干擾核糖核酸和12%～18%的多聚磷酸鈉；

優選的，所述的小分子干擾核糖核酸殼聚糖納米粒傳遞系統，還包括載體，所述載體選自環糊精衍生物或海藻糖中的一種以上；其中環糊精衍生物具有促進納米粒鼻粘膜吸收的作用，海藻糖具有凍干時保護納米粒作用；

所述納米粒凍干前后粒徑為60~200nm，Zeta電勢10～70mV；

優選的，凍干前后粒徑為80~150nm，Zeta電勢20～40mV。

所述載體與殼聚糖、小分子干擾核糖核酸和多聚磷酸鈉總重量之比為

載體∶總重量=20～100∶1；

優選的為：

載體∶總重量=50～70∶1；

優選的，所述載體為環糊精衍生物和海藻糖的混合物，重量比為：

環糊精衍生物∶海藻糖=1～3.5∶1；