[發明專利]一種用于特定植物纖維高效水解的纖維素酶的生產方法

無效

• 申請號: 201210434660.1
• 申請日: 2012-11-05
• 公開（公告）號: CN102899301A
• 公開（公告）日: 2013-01-30
• 發明（設計）人: 李強;谷緒頂;季更生;費娟娟;馮圓圓
• 申請（專利權）人: 江蘇科技大學
• 主分類號: C12N9/42
• 分類號: C12N9/42;C12R1/685;C12R1/885
• 代理公司: 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙) 32204
• 代理人: 繆友菊

1.一種用于特定植物纖維高效水解的纖維素酶的生產方法，其特征在于包括如下步驟：

（1）底物選取：取特定植物纖維作為底物；

（2）纖維素酶產生菌的活化培養：將纖維素酶產生菌接種至含有活化培養基的器皿中靜置培養制得纖維素酶產生菌的活化培養液；

（3）纖維素酶的誘導：將步驟（1）的底物作為誘導物，制備產酶培養基；將步驟（2）的纖維素酶產生菌的活化培養液接種到所述產酶培養基中發酵產酶，在25～30℃，轉速為100～180?r/min條件下培養，發酵時間為3～7?d，得到發酵液；

其中，所述產酶培養基的配方為：誘導物2～6?g/L，葡萄糖1～3?g/L，微晶纖維素2～3?g/L，蛋白胨1～2?g/L，(NH₄)₂SO₄?2～3?g/L，KH₂PO₄?3～4?g/L，尿素0.4～0.6?g/L，CaCl₂·2H₂O?0.6～1.0?g/L,?MgSO₄·7H₂O?0.4～0.8g/L，FeSO₄·7H₂O?0.01～0.04?g/L，MnSO₄·H₂O?0.001～?0.004?g/L，ZnSO₄·7H₂O?0.002～0.004?g/L，CoCl₂·6H₂O?0.004～0.008?g/L，吐溫80?0.3～0.5?g/L，其余為水，pH?5.0；

（4）發酵液的鹽析和透析：將發酵液分別進行鹽析和透析處理，得到用于特定植物纖維素水解的纖維素酶。

2.根據權利要求1所述的用于特定植物纖維高效水解的纖維素酶的生產方法，其特征在于：步驟（1）中，先對底物粉碎至60目，然后烘干至恒重。

3.根據權利要求1所述的用于特定植物纖維高效水解的纖維素酶的生產方法，其特征在于：步驟（1）中，所述特定植物纖維為桑葉粉和紙漿。

4.根據權利要求1所述的用于特定植物纖維高效水解的纖維素酶的生產方法，其特征在于：步驟（2）中，所述纖維素酶產生菌為黑曲霉、里氏木霉、綠色木霉或康寧木霉。

5.根據權利要求1所述的用于特定植物纖維高效水解的纖維素酶的生產方法，其特征在于：步驟（2）中，纖維素酶產生菌的活化培養包括如下步驟：

（2-1）纖維素酶產生菌的固態培養活化

在無菌條件下，將纖維素酶產生菌接種至PDA固體培養基上，28℃恒溫靜置培養3-4d，然后4?℃儲存；?

（2-2）纖維素酶產生菌的液態培養活化

將纖維素酶產生菌的斜面培養基取出，在無菌條件下挑取一環孢子，并接種至裝有液態活化培養基的錐形瓶中，在28?℃下靜置培養2?d。

6.根據權利要求1所述的用于特定植物纖維高效水解的纖維素酶的生產方法，其特征在于：所述鹽析過程為，將發酵液取出常溫常壓過濾，在4℃和磁力攪拌器勻速攪拌條件下進行鹽析，添加硫酸銨的飽和度達50％，攪拌充分混合30min；然后再在10000?r/min條件下離心10?min。

7.根據權利要求1所述的用于特定植物纖維高效水解的纖維素酶的生產方法，其特征在于：所述透析過程為，將鹽析后的發酵液注入透析袋中，在pH為4.8?、溫度為4℃的0.05M的檸檬酸—檸檬酸鈉緩沖液中透析24?h。