[發(fā)明專利]一種鰻鱺嗜水氣單胞菌和遲鈍愛德華氏菌二聯(lián)重組蛋白及其制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210433570.0
• 申請日: 2012-10-26
• 公開（公告）號: CN103509120A
• 公開（公告）日: 2014-01-15
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 郭松林;關(guān)瑞章;王玉;馮建軍;林鵬;黃文樹
• 申請（專利權(quán)）人: 集美大學(xué)
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N15/63;C12N1/21;C12R1/19
• 代理公司: 廈門市首創(chuàng)君合專利事務(wù)所有限公司 35204
• 代理人: 連耀忠

1.一種鰻鱺嗜水氣單胞菌和遲鈍愛德華氏菌二聯(lián)重組蛋白，其特征在于：包括連接在一起的嗜水氣單胞菌II型孔蛋白膜外部分和遲鈍愛德華氏菌ompS2膜外部分，其氨基酸序列分別如SEQ?ID?NO1的第271~544位和第1~257位所示。

2.如權(quán)利要求1所述的一種鰻鱺嗜水氣單胞菌和遲鈍愛德華氏菌二聯(lián)重組蛋白，其特征在于：所述嗜水氣單胞菌II型孔蛋白膜外部分和遲鈍愛德華氏菌ompS2膜外部分通過一段連接肽連接在一起，該連接肽的序列如SEQ?IDNO1的第258~270位所示。

3.一種編碼權(quán)利要求1所述的鰻鱺嗜水氣單胞菌和遲鈍愛德華氏菌二聯(lián)重組蛋白的基因序列，其特征在于：包括連接在一起的嗜水氣單胞菌II型孔蛋白膜外部分的編碼核苷酸序列和遲鈍愛德華氏菌ompS2膜外部分的編碼核苷酸序列，上述編碼核苷酸序列分別如SEQ?ID?NO2的第831~1612位和第1~771位所示。

4.如權(quán)利要求3所述的一種編碼鰻鱺嗜水氣單胞菌和遲鈍愛德華氏菌二聯(lián)重組蛋白的基因序列，其特征在于：所述嗜水氣單胞菌II型孔蛋白膜外部分的基因序列和遲鈍愛德華氏菌ompS2膜外部分的基因序列通過一段如SEQ?ID?NO2的第772~810位所示的編碼一段連接肽的核苷酸序列連接起來。

5.一種表達(dá)權(quán)利要求1所述的鰻鱺嗜水氣單胞菌和遲鈍愛德華氏菌二聯(lián)重組蛋白的質(zhì)粒，其特征在于：包括負(fù)載有SEQ?ID?NO2所示核苷酸序列的原核表達(dá)載體。

6.如權(quán)利要求5所述的一種表達(dá)鰻鱺嗜水氣單胞菌和遲鈍愛德華氏菌二聯(lián)重組蛋白的質(zhì)粒，其特征在于：所述原核表達(dá)載體為融合表達(dá)載體。

7.一種表達(dá)權(quán)利要求1所述的鰻鱺嗜水氣單胞菌和遲鈍愛德華氏菌二聯(lián)重組蛋白的大腸桿菌，其特征在于：所述大腸桿菌轉(zhuǎn)化有負(fù)載SEQ?ID?NO2所示核苷酸序列的原核表達(dá)載體。

8.如權(quán)利要求6所述的一種表達(dá)鰻鱺嗜水氣單胞菌和遲鈍愛德華氏菌二聯(lián)重組蛋白的大腸桿菌，其特征在于：所述原核表達(dá)載體為融合表達(dá)載體。

9.如權(quán)利要求7或8所述的一種表達(dá)鰻鱺嗜水氣單胞菌和遲鈍愛德華氏菌二聯(lián)重組蛋白的大腸桿菌，其特征在于：所述用于表達(dá)的大腸桿菌為大腸桿菌BL21或大腸桿菌DH5α。

10.一種權(quán)利要求1所述的鰻鱺嗜水氣單胞菌和遲鈍愛德華氏菌二聯(lián)重組蛋白的制備方法，其特征在于：包括如下步驟：

（1）分別擴(kuò)增編碼嗜水氣單胞菌II型孔蛋白膜外部分和遲鈍愛德華氏菌ompS2膜外部分的基因序列，其氨基酸序列分別如SEQ?ID?NO1的第271~544位和第1~257位所示，其核苷酸序列分別如SEQ?ID?NO2的第831~1612位和第1~771位所示；

（2）將步驟（1）所得的兩個基因序列連接在一起，得到融合基因序列；

（3）將步驟（2）所得的融合基因序列連接到原核表達(dá)載體中，構(gòu)建重組表達(dá)載體；

（4）將步驟（3）中所構(gòu)建的重組表達(dá)載體轉(zhuǎn)化到原核宿主細(xì)胞中，并在適于表達(dá)所述融合基因的條件下培養(yǎng)被轉(zhuǎn)化的原核宿主細(xì)胞；

（5）回收并純化所培養(yǎng)的原核宿主細(xì)胞表達(dá)的融合蛋白；

（6）對步驟（5）所得的融合蛋白進(jìn)行復(fù)性。