[發明專利]一種親本青蝦與秋繁苗的區分方法

無效

• 申請號: 201210432751.1
• 申請日: 2012-11-03
• 公開（公告）號: CN102919171A
• 公開（公告）日: 2013-02-13
• 發明（設計）人: 金舒博;傅洪拓;喬慧;龔永生;蔣速飛;熊貽偉
• 申請（專利權）人: 中國水產科學研究院淡水漁業研究中心
• 主分類號: A01K61/00
• 分類號: A01K61/00
• 代理公司: 無錫市大為專利商標事務所 32104
• 代理人: 殷紅梅

技術領域

本發明涉及一種親本青蝦與秋繁苗的區分方法，具體涉及一種通過中性紅活體染色方法以區分親本青蝦與秋繁苗的方法，屬于漁業繁殖技術領域。

背景技術

青蝦，學名日本沼蝦(Macrobrachium?nipponense)，隸屬十足目（Decapoda），長臂蝦科（Palaemonidae）、沼蝦屬（Macrobrachium），廣泛分布于全國各地，是我國重要的淡水養殖蝦類。近年來，隨著養殖產業的不斷擴大，青蝦種質資源退化嚴重，規格小、性早熟等現象成為制約青蝦養殖業可持續發展的關鍵問題。

青蝦性成熟早，繁殖能力強，每年的4-9月份均可產卵繁殖。秋季抱卵，親蝦日常所攝食的營養大部分用于胚胎發育，生長速度自然減慢；再者，產生的大量秋繁苗與親蝦爭食、爭空間，必然會相互制約生長，嚴重影響青蝦養殖的經濟效益。并且，秋繁苗對青蝦種質資源的保護有很多不利的影響，很大程度上阻礙了青蝦養殖的持續、健康發展。青蝦苗種生產多半是單家獨戶自繁自育，種蝦未經選育，有些養殖戶采取一次性放苗、全年捕撈或多年捕撈，造成青蝦三代同塘，近親繁殖的概率增大，青蝦種質的退化現象已逐步明顯，具體表現為個體偏小，懷卵量減少，性成熟提早，抗病力下降等。另一方面，青蝦苗種的無序流動，種質混雜，逃苗入河對天然資源庫的污染等，蝦苗的雜化是不言而喻的，種質的退化和雜化，將導致苗種生產的惡性循環，苗種的質量難以保證。解決青蝦種質資源退化的關鍵是找出一個合理的辦法區分青蝦親本與秋繁苗，減少近親繁殖的概率，以達到青蝦種質資源的保護，實現青蝦養殖業的持續，健康發展。

活體染色（vital?staining）一般是選用無毒或毒性很小的染料,在不影響細胞的正常生命活動的前提下而使活細胞的某些結構著色的一種實驗方法，最早進行活體染色的是Paul?Ehrlich（1885）他把瞰切下的新鮮組織浸泡在亞甲基藍（美藍）溶液中，再用顯微鏡來觀察尚處在生活狀態下的活細胞結構。中性紅（Neutral?red），是細胞活體染色和酸堿性指示劑的一種堿性吩嗪染料。中性紅是一種弱堿性?pH?指示劑在中性或微堿性環境中，植物的活細胞能大量吸收中性紅并向液泡中排泌，由于液泡在一般情況下呈酸性反應，因此，進入液泡的中性紅便解離出大量陽離子而呈現櫻桃紅色，在這種情況下，原生質和細胞壁一般不著色；死細胞由于原生質變性凝固，細胞液不能維持在液泡內，因此，用中性紅染色后，不產生液泡著色現象，相反，中性紅的陽離子，卻與帶有一定負電荷的原生質及細胞核結合，而使原生質與細胞核染色。中性紅無毒，常做活體染色的染料，用來染原生動物和顯示動植物組織中活細胞的內含物等。陳久的中性紅水溶液，用作顯示尼爾體的常用染料。因此，開展中性紅作為活體染料以區分親本青蝦與秋繁苗的研究，對與減少近親繁殖的概率，以達到青蝦種質資源的保護，實現青蝦養殖業的持續，健康發展起重要的作用。

中性紅是弱堿性染料，呈紅色粉末狀，能溶于水（溶解度4%）和酒精（溶解度1.8%）。它的堿性溶液中呈現黃色，在強堿性溶液中呈藍色，而在弱酸性溶液中呈紅色，所以能用作指示劑。

發明內容

本發明的目的是克服上述不足之處，提供一種青蝦中性紅活體染色方法，并提供最適的染色時間及染色濃度，以達到穩定的染色并不影響健康青蝦的活力。利用本發明提供的中性紅最適染色時間及染色濃度可區分青蝦親本與秋繁苗，對實現青蝦家系選育提供理論基礎，減少近親繁殖的概率，以達到青蝦種質資源的保護，實現青蝦養殖業的持續，健康發展，為青蝦良種繁育奠定理論基礎。

按照本發明提供的技術方案，一種親本青蝦與秋繁苗的區分方法，步驟為：

（1）中性紅溶液的配置：取中性紅粉末，倒入試驗缸，邊攪拌邊注入自來水，注水速度為40~60?dm³/h，攪拌速度為100~200r/min，配制成中性紅︰水質量比為1︰4000~7000的中性紅溶液；

（2）青蝦飼養：取健康的青蝦在步驟（1）配置的中性紅溶液中飼養6h~5d，飼養過程中不斷充氧并喂食，每天喂食兩遍。

步驟（1）中注水速度為50?dm³/h，攪拌速度為150?r/min。

所述中性紅︰水質量比為1︰4000~5000。

所述中性紅︰水質量比為1︰4000、1︰4500或1︰5000。

步驟（2）所述飼養時間為5d，溶氧量為5~7?mg/L。

所述溶氧量為6.5?mg/L。

利用中性紅作為活性染色劑安全的證明見實質審查參考資料1。