[發(fā)明專利]用于檢測牛白細(xì)胞粘附缺陷病的引物及探針、試劑盒和方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210420204.1
• 申請日: 2012-10-29
• 公開（公告）號: CN103088119A
• 公開（公告）日: 2013-05-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 謝明星;彭小莉;劉棠;陳偉玲;王群力;王景明;徐維佳;孫福泉;王偉
• 申請（專利權(quán)）人: 廈門出入境檢驗(yàn)檢疫局檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 廈門市新華專利商標(biāo)代理有限公司 35203
• 代理人: 李寧

1.用于檢測牛白細(xì)胞粘附缺陷病的引物及探針，其特征在于：引物包括上游引物：5’-TTGCGTTCAACGTGACCTTC-3’和下游引物5’-?TCACCCCCCAGCTTCTTG?-3’；探針包括突變型等位基因探針：HEX-5’-CCATCGGCCTGTAC-3’-MGB和野生型等位基因探針：FAM-5’-CCCATCGACCTGTACT-3’-MGB。

2.用于檢測牛白細(xì)胞粘附缺陷病的試劑盒，其特征在于：含有如權(quán)利要求1所述的引物和探針。

3.用于檢測牛白細(xì)胞粘附缺陷病的方法，其特征在于：使用如權(quán)利要求1所述的引物和探針或如權(quán)利要求2所述的試劑盒，采用實(shí)時熒光定量PCR的方法，包括實(shí)時熒光定量PCR反應(yīng)體系的配制及實(shí)時熒光定量PCR反應(yīng)。

4.如權(quán)利要求3所述的用于檢測牛白細(xì)胞粘附缺陷病的方法，其特征在于：在實(shí)時熒光定量PCR反應(yīng)之前，還包括提取牛血總DNA的步驟。

5.如權(quán)利要求4所述的用于檢測牛白細(xì)胞粘附缺陷病的方法，其特征在于：實(shí)時熒光定量PCR反應(yīng)體系的配制，總體積為50μL，配制如下：

TaqMan?Fast?Universal?PCR?Master?Mix(2×)???????????25μL；

上游引物（10μmol/L）????????????????????????????1μL；

下游引物（10μmol/L）????????????????????????????1μL；

突變型等位基因探針（10μmol/L）??????????????????1μL；

野生型等位基因探針（10μmol/L）??????????????????1μL；

DNA模板（25ng/μL）?????????????????????????????5μL；?

補(bǔ)水至50μL。

6.如權(quán)利要求5所述的用于檢測牛白細(xì)胞粘附缺陷病的方法，其特征在于：實(shí)時熒光定量PCR反應(yīng)包括以下步驟：

1）95℃變性10min；

2）95℃變性30s，60℃退火延伸1min，循環(huán)40次。