[發明專利]一種短小芽孢桿菌菌株及其應用

有效

• 申請號: 201210413435.X
• 申請日: 2012-10-25
• 公開（公告）號: CN102911901A
• 公開（公告）日: 2013-02-06
• 發明（設計）人: 彭虹旎;梁莉;馬俊孝
• 申請（專利權）人: 青島蔚藍生物集團有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A23K1/16;C12R1/07
• 代理公司: 青島海昊知識產權事務所有限公司 37201
• 代理人: 曾慶國

技術領域

本發明屬于微生物篩選、應用技術領域，具體涉及一種短小芽孢桿菌菌株及其應用。?

背景技術

隨著環保意識的增強，對于抗生素濫用引起的耐藥性病原菌增加，以及畜禽產品藥殘超標等嚴重問題備受關注，人們對抗生素飼料添加劑帶來的負面效應意識也在不斷提高。歐盟已全面禁止飼料中使用抗生素促生長飼料添加劑。為了應對這些問題，采用益生菌微生態制劑的生物防治措施成為當前畜禽養殖熱點而受到重視。?

益生菌在其生長代謝過程中，會分泌產生多種物質，比如抗菌肽、細菌素，一方面可以拮抗大腸桿菌等病原菌生長，另一方面利于自身定植，促進動物生長，改善免疫等。微生態制劑作為一種新型的抗生素替代品的添加劑，具有無毒副作用、無耐藥性、無殘留、效果顯著等優點，受到了畜禽養殖的歡迎。作為飼用抗生素替代添加劑，微生態制劑研究和開發前景廣闊。因此，篩選出具有良好效果的益生菌就具有重要的意義。但目前飼用添加劑的益生菌以枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌最為常見，而短小芽孢桿菌在動物飼料、預混料、飼料添加劑方面的報道和研發較少。?

發明內容

本發明的目的是提供一株新型短小芽孢桿菌及其在畜禽養殖中的應用，所述短小芽孢桿菌篩選自肉雞養殖場的土壤，對動物源大腸桿菌、沙門氏菌生長有顯著抑制作用，可作為飼料添加劑應用于畜禽飼料中，促進養殖動物的生產性能。?

本發明一方面提供了一株短小芽孢桿菌，該菌株命名為短小芽孢桿菌BP14(Bacillus?pumilus?BP14)，已于2012年10月25日保藏于“中國典型培養物保藏中心”，其保藏編號為CCTCC?NO:M?2012428。?

本發明的短小芽孢桿菌BP14可應用于飼料添加劑領域。?

本發明的另一個方面提供一種包含上述短小芽孢桿菌BP14的微生物制劑。?

上述的微生物制劑為短小芽孢桿菌BP14的菌粉，按質量百分比為0.1%-1%的比例添加至畜禽飼料中。?

本發明從肉雞養殖場土壤中篩選到一株短小芽孢桿菌BP14，該菌株耐高溫、產蛋白酶，對動物源大腸桿菌、沙門氏菌生長具有顯著的抑制作用，能有效促?進養殖動物的生產性能，可作為飼料添加劑應用于畜禽飼料中，應用前景廣闊。?

具體實施方式

實施例1短小芽孢桿菌BP14分離篩選及鑒定：?

1、芽孢桿菌初篩?

采集肉雞養殖場土樣6份，分別稱取25g土樣，加入225mL無菌水，制備成懸液，經80℃水浴處理10min后，涂布于營養瓊脂平板上，培養獲得50株芽孢桿菌。?

2、抑菌型芽孢桿菌篩選?

1)指示菌：大腸桿菌(ATCC25922)、沙門氏菌(ATCC14028)，接種于營養肉湯中，37℃，200rpm，培養15h；?

2)制備芽孢桿菌液：初篩分離的芽孢桿菌，接種于營養肉湯中，37℃，200rpm，培養24h；?

3)體外抑菌實驗—微量肉湯法：將培養24h的芽孢桿菌液離心、收集上清，取無菌96孔培養板，按1:1比例加入芽孢桿菌上清液及病原菌液，使得其中病原菌濃為1×10⁸cfu/mL，37℃，200rpm，作用6h，(對照組為不添加芽孢桿菌上清的病原菌液)，取出讀取各處理的OD₆₀₀，計算抑菌率，公式如下：?

A為對照組OD₆₀₀，A0為0h數據；A2為6h數據；?

B為芽孢桿菌上清處理組OD₆₀₀，B0為0h數據；B2為6h數據；?

4)經體外抑菌實驗，篩選得到1株對大腸桿菌(ATCC25922)、沙門氏菌(ATCC14028)生長抑制顯著的芽孢桿菌，并進一步鑒定分析。?

3、芽孢桿菌鑒定?

1)生化反應采用API50細菌鑒定系統，上述芽孢桿菌的生物學特性如下：?

a、菌落形態特征：?

在營養瓊脂培養基上培養18-24小時，呈現為灰黃色、不透明、表面濕潤、有皺褶、直徑約2-4mm菌落；?

b、細胞形態特征：?

經革蘭氏染色呈陽性、短桿狀，芽孢為橢圓狀，位于中部或偏端；?

c、生理生化特征：?

V-P試驗(+)，淀粉水解(+)，酪素水解(+)，明膠水解(+)，硝酸鹽還原(-)，吲哚試驗(-)，生長溫度范圍15~45℃，pH范圍5~9，高于7%NaCl不生長；?

生化鑒定結果顯示該芽孢桿菌為短小芽孢桿菌。?