[發(fā)明專利]人工合成人腸激酶基因及其表達(dá)純化方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210410156.8
• 申請(qǐng)日: 2012-10-24
• 公開（公告）號(hào): CN102911955A
• 公開（公告）日: 2013-02-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 鈕利喜;楊斌盛;石亞偉;李嬌;吉雪雪
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 山西大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N15/57
• 分類號(hào): C12N15/57;C12N15/63;C12N1/21;C12N9/64;C12N15/70;C12R1/19
• 代理公司: 山西五維專利事務(wù)所(有限公司) 14105
• 代理人: 楊耀田

1.一種人工合成的人腸激酶輕鏈（hEKL）基因，其特征在于核苷酸序列是SEQ?NO?1。

2.一種表達(dá)載體，其特征在于，它含有權(quán)利要求1所述的人腸激酶輕鏈基因。

3.如權(quán)利要求2所述的表達(dá)載體，其特征在于，它含有Tac啟動(dòng)子。

4.一種工程菌，其特征在于，它含有權(quán)利要求3所述的表達(dá)載體。

5.如權(quán)利要求4所述的工程菌，其特征在于，它是大腸桿菌。

6.如權(quán)利要求1所述的人工合成的人腸激酶輕鏈基因的表達(dá)純化方法，其特征在于，包括如下步驟：

1）構(gòu)建含有人工合成的hEK_L基因的重組質(zhì)粒pMAL-s-hEK_L；

2）將重組質(zhì)粒pMAL-s-hEK_L轉(zhuǎn)化至大腸桿菌BL21(DE3)細(xì)胞中，得到含有重組質(zhì)粒的工程菌株；

3）將工程菌接種到LB培養(yǎng)基溶液中培養(yǎng)，當(dāng)工程菌培養(yǎng)液濃度OD_600nm達(dá)到0.6-0.8時(shí)，加入終濃度為0.1-1.0mM的IPTG，37℃誘導(dǎo)表達(dá)3-6小時(shí)，離心收集菌體，超聲破碎后離心，取上清，

4）用Amylose親和層析的方法純化得到目的蛋白MBP-hEK_L。