[發(fā)明專利]一種凝結(jié)芽孢桿菌的固體發(fā)酵生產(chǎn)方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210405874.6
• 申請(qǐng)日: 2012-10-23
• 公開（公告）號(hào): CN103289910A
• 公開（公告）日: 2013-09-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 夏新界;李本濤;印遇龍;何宏軒;王從峰;李愛科;佘銳萍;李剛;李帥偉
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣州格拉姆生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12N1/20
• 分類號(hào): C12N1/20;A23K1/16;C12R1/07
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種凝結(jié)芽孢桿菌的固體發(fā)酵生產(chǎn)方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）菌種活化：將-80℃保存的菌種在固體種子培養(yǎng)基固體平板上劃線，在溫度為37~40℃的條件下培養(yǎng)20~24小時(shí)，所述菌種為凝結(jié)芽孢桿菌（Bacillus?coagulans）；

（2）制備一級(jí)種子：將活化的凝結(jié)芽孢桿菌，用接種環(huán)挑取三到五環(huán)接種于200?mL?液體種子培養(yǎng)基中，將三角瓶置于搖床中，在溫度為37~40℃和250rpm的條件下，振蕩培養(yǎng)20~24小時(shí)后，制得一級(jí)種子菌；

（3）配制固體發(fā)酵培養(yǎng)基：將固體干基加入質(zhì)量比為1:1~2的無菌水，并在pH值為自然條件下，攪拌均勻，將固體培養(yǎng)基在溫度為121℃條件下，高溫高壓滅菌20min，待冷卻后即可作為固體發(fā)酵培養(yǎng)基使用；

（4）固體發(fā)酵：將經(jīng)過滅菌處理的固體發(fā)酵培養(yǎng)基按照8~10%的接種量接入一級(jí)種子菌，攪拌均勻，保持濕度為50~70%和溫度為37~40℃的條件下，培養(yǎng)20~24小時(shí)，制得二級(jí)種子；

（5）將得到的二級(jí)種子，按照步驟（4）進(jìn)一步固體發(fā)酵得到三級(jí)種子；

（6）可以根據(jù)具體的培養(yǎng)用量，進(jìn)一步將三級(jí)種子按照步驟（4）進(jìn)一步固體發(fā)酵擴(kuò)大培養(yǎng)；

（7）將凝結(jié)芽孢桿菌培養(yǎng)物進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)，活菌體濃度可達(dá)9.10×10^9?CFU/g?鮮曲，芽孢濃度可達(dá)2.45×10⁹?CFU/g?鮮曲。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的凝結(jié)芽孢桿菌的固體發(fā)酵生產(chǎn)方法，其特征在于：所述步驟（1）中固體種子培養(yǎng)基的組成為：胰化蛋白胨10g、酵母提取物5g、NaCl10g、25%濃度MnSO₄添加至0.2%，和瓊脂粉15g。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的凝結(jié)芽孢桿菌的固體發(fā)酵生產(chǎn)方法，其特征在于：所述步驟（2）中的液體種子培養(yǎng)基的組成為：胰化蛋白胨?10g、酵母提取物?5g、NaCl?10g，和25%濃度MnSO₄添加至0.2%。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的凝結(jié)芽孢桿菌的固體發(fā)酵生產(chǎn)方法，其特征在于：所述培養(yǎng)基均通過高溫高壓滅菌后使用。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的凝結(jié)芽孢桿菌的固體發(fā)酵生產(chǎn)方法，其特征在于：所述步驟（3）中的固體干基為：以玉米粉和豆餅粉為基礎(chǔ)料、KH₂PO₄?0.3~0.5wt%、MnSO₄·H2O?0.02wt%和MgSO₄·7H₂O?0.125wt‰。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的凝結(jié)芽孢桿菌的固體發(fā)酵生產(chǎn)方法，其特征在于：所述基礎(chǔ)料中玉米粉與豆餅粉的質(zhì)量之比為2:1。

7.權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)所述的凝結(jié)芽孢桿菌的固體發(fā)酵生產(chǎn)方法制備的凝結(jié)芽孢桿菌培養(yǎng)物用于動(dòng)物養(yǎng)殖業(yè)中的飼料添加劑。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的凝結(jié)芽孢桿菌培養(yǎng)物用于動(dòng)物養(yǎng)殖業(yè)中的飼料添加劑，其特征在于：所述的凝結(jié)芽孢桿菌培養(yǎng)物的添加量為1~3wt%。