[發明專利]一種貫眾提取物及其制備方法和應用

無效

• 申請號: 201210404947.X
• 申請日: 2012-10-23
• 公開（公告）號: CN102861109A
• 公開（公告）日: 2013-01-09
• 發明（設計）人: 楊松;楊勝杰;薛偉;胡德禹;劉明川;梁娜;劉敏潔;趙洪菊;龔華玉
• 申請（專利權）人: 貴州大學
• 主分類號: A61K36/11
• 分類號: A61K36/11;A61P35/00;A61P39/06
• 代理公司: 貴陽東圣專利商標事務有限公司 52002
• 代理人: 徐逸心;袁慶云

技術領域

本發明涉及一種中藥的提取物，具體地說是一種貴州中草藥貫眾的提取物，同時還涉及貫眾的提取物的制備方法和應用。?

背景技術

人體衰老與惡性腫瘤的發生均于人體細胞中過量的自由基，特別是與活性氧自由基有關。人體每個細胞的DNA每天都要受到104次氧化攻擊而引起損傷。自由基摧毀細胞膜，使細胞不能吐故納新，并喪失了對細菌和病毒的抵御能力；自由基攻擊正在復制中的基因，造成基因突變，誘發癌癥的發生。而癌癥的發病率以每年在3%到5%的速度在提高，以癌癥引起的死亡率已經成為世界第一的死亡率。因此，尋找有效的抗癌抗氧化的藥物仍是全球性的嚴峻課題。?

發明人一直從事中草藥有效成分的提取分離及活性研究，特別重視抗癌和抗氧化發面的藥物的有效成分的提取及活性研究，發明人研究發現貫眾提取物具有抗癌和和抗氧化的作用。?

貫眾為鱗毛蕨科植物貫眾屬植物的干燥根莖及葉柄殘基，附生林下，產于貴州、云南、四川、西藏等。其味苦、微寒，有小毒，歸肝，胃經，具有清熱解毒、驅蟲等功能。現代藥理研究表明，具有抗病毒、驅蟲、抗腫瘤、興奮子宮等作用，臨床用于治療肺炎、乙型肝炎、腸道寄生蟲病、婦產科出血等。但在現有的中醫中藥資料中，尚未發現將貫眾的提取物用于治療癌癥或具有抗癌和抗氧化作用的記載和報道。?

發明內容

本發明的目的在于提供一種貫眾的提取物。?

同時，本發明的目的還在于提供一種貫眾的提取物的制備方法。?

本發明的目的還在于提供一種貫眾的提取物在制備抗癌和抗氧化藥物方面的應用。?

為了實現上述目的，本發明一種貫眾提取物及其制備方法和應用，其提取物是以中藥貫眾為原料，經乙醇浸提而得的一種貫眾乙醇提取液，回收溶劑后得到乙醇總提取物，水分散后依次使用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇進行萃取，回收乙酸乙酯和正丁醇溶劑后，得到乙酸乙酯和正丁醇萃取物。將乙酸乙酯和正丁醇萃取物進行柱層析，得到16個粗分段。將貫眾乙酸乙酯和正丁醇萃取物以及粗分段進行抗癌抗氧化活性測試，測試結果表明，貫眾的乙酸乙酯和正丁醇萃取物以及部分粗分段均有較好的抗癌抗氧化的活性。?

本發明一種貫眾提取物的制備方法，按以下步驟制備：?

(1)?將干燥的貫眾的塊莖粉碎后，加入2-3倍原料和總量的80%的乙醇水溶液加熱回流提取，第一次回流提取6小時，第二次回流提取3小時，第三次回流提取1小時，然后合并三次乙醇浸提液。

(2)?將三次合并的乙醇浸提液減壓蒸餾，回收乙醇溶液，得到乙醇總提取物浸膏，將乙醇浸膏水分散，一次使用10升的石油醚、乙酸乙酯以及正丁醇分別萃取3次。?

(3)?將乙酸乙酯和正丁醇萃取液減壓蒸餾，回收溶劑，得到乙酸乙酯和正丁醇萃取物。

(4)?將乙酸乙酯和正丁醇萃取物進行柱層析，得到16個粗分段。?

本發明一種貫眾提取物的應用是指貫眾的乙酸乙酯和正丁醇萃取物以及粗分段用于制備抗癌藥物方面的應用。?

本發明一種貫眾提取物的應用是指貫眾的乙酸乙酯和正丁醇萃取物以及粗分段用于制備抗氧化藥物方面的應用。?

將貫眾的乙酸乙酯和正丁醇萃取物以及粗分段使用DMSO溶解，阿霉素為陽性對照藥，0.1%的DMSO的培養基為陰性對照，使用MTT法，對人類前列腺癌細胞PC3，胃癌細胞BGC-823，乳腺癌細胞Bcap-37以及黑色肉瘤細胞A375體外抑制增殖的生物活性研究。研究表明貫眾的乙酸乙酯和正丁醇萃取物以及部分粗分段對這四種癌細胞具有較好的抑制作用。?

將貫眾的乙酸乙酯和正丁醇萃取物以及粗分段使用無水乙醇溶解，維生素C為陽性對照藥，無水乙醇為陰性對照，使用DPPH微孔板法測其抗氧化生物活性測試。測試結果表明貫眾的乙酸乙酯和正丁醇萃取物以及部分粗分段具有較好的抗氧化生物活性，甚至高于維生素C的抗氧化能力?

附圖說明：貫眾屬植物的主要化學成分主要是萜類、酚類、甾體類化合物，因此為研究其主要抗癌抗氧化化學成分，本發明涉及使用氣質聯用的方法對活性較好的提取層進行化學成分分析。

圖1：山地貫眾乙酸乙酯層化學成分分析。?

在保留時間15分鐘和30分鐘左右峰面積較多，由此可知在此保留時間的化合物主要是萜類和酚類化合物，因此萜類和酚類物質可能是此萃取層的主要活性成分。?

圖2：山地貫眾正丁醇層化學成分分析。?

在保留時間30分鐘左右峰面積最多，由此可知在此保留時間出現的化合物主要是萜類化合物，因此在此萃取層主要的活性物質是萜類成分。?