[發明專利]一種重組脊髓灰質炎病毒Ⅰ型病毒樣顆粒的制備方法

有效

• 申請號: 201210390829.8
• 申請日: 2012-10-15
• 公開（公告）號: CN102876707A
• 公開（公告）日: 2013-01-16
• 發明（設計）人: 盛望;王曉雯;陳立;趙淼;曾毅;李澤琳;劉偉
• 申請（專利權）人: 北京工業大學
• 主分類號: C12N15/81
• 分類號: C12N15/81;C12N7/04;C12N15/43;C12N15/63;C12N5/10;C12N1/19;A61K39/13;A61P31/14;C12R1/93
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;任鳳華

技術領域

本發明涉及一種重組脊髓灰質炎病毒Ⅰ型病毒樣顆粒的制備方法，特別涉及利用經過密碼子優化的脊髓灰質炎病毒Ⅰ型P1基因和3ABC基因，通過酵母表達系統制備重組脊髓灰質炎病毒Ⅰ型病毒樣顆粒的方法。

背景技術

脊髓灰質炎作為一種疾病，兩百多年前已有文字記載，1789年Underwood首次對該病進行了描述[Underwood?M.A?Treatise?of?Children?with?General?Directions?foranagement?of?Infants?from?Birth,2nd?ed.London:Matthews;1789.]。從1948年開始，人類開始不斷確定不同脊髓灰質炎病毒株的數量，小兒麻痹癥國家基金委員會1951年報道了只有3型脊灰病毒可以引起脊灰，根據血清型分別命名為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型[Committee?onTyping?of?the?National?Foundation?for?Infantile?Paralysis.Immunologic?classification?ofpoliomyelitis?viruses:a?cooperative?program?for?the?typing?of?one?hundred?strains.Am?JHyg?54:191-274,1951]。脊髓灰質炎病毒的三種抗原類型（血清Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型）除了免疫原型不同外，其他方面都非常類似。每型的基因組序列都已完全確定，包括3種Sabin口服脊灰疫苗株。對于脊髓灰質炎病毒來說，只有蛋白質外殼的編碼序列是獨特的，因為在自然循環中，側面的序列經常會通過與相近的腸道病毒（腸道病毒C種）重組而發生變化。

脊髓灰質炎病毒普遍存在、傳染性高并具有季節性（溫帶氣候國家更明顯），未免疫人群中幾乎所有人均可感染脊髓灰質炎病毒，脊髓灰質炎病毒感染者中少數人（小于1%）可出現麻痹癥狀，如頓挫型、非麻痹型和麻痹型脊髓灰質炎，也可引起無菌性腦膜炎。Ⅰ型脊髓灰質炎病毒在3種型中最具神經侵襲性，多數脊灰流行及地方性流行病例都是由Ⅰ型脊髓灰質炎病毒引起的，其次為Ⅲ型和Ⅱ型。傳播高峰發生在嬰兒和小年齡兒童（熱帶地區）及學齡兒童（溫帶地區）。脊髓灰質炎是人傳人疾病，通過糞-口、口-口途徑傳播，少數情況通過共同媒介（如水、牛奶）傳播。其感染性主要在麻痹出現前及出現后1~2周，因此其傳染期可能達4~8周，家庭易感者或其接觸者的繼發感染率很高（可能因為糞-口傳播），大于90%。

脊髓灰質炎病毒屬于微小核糖核酸病毒科（Picornaviridae），腸道病毒屬（Enterovirus）。其毒粒為球形正二十面體立體對稱，直徑約為27-30nm，無包膜，其核衣殼包含單股正鏈RNA基因組，約由7500個核苷酸組成。其組成從5’端到3’端的方向依次為5’端非編碼區，P1區、P2區、P3區和一段3’端非編碼區。P1區編碼病毒的主要結構蛋白，即衣殼蛋白，其轉錄及翻譯產物經蛋白酶水解后，最終得到4個蛋白產物，分別為VP4(1A)，VP2(1B)，VP3（1C）及VP4(1D)，其衣殼結構由60個亞單位片段組成，每個片段由4種衣殼蛋白（從VP1到VP4）組成。脊髓灰質炎病毒主要的中和抗原位點位于VP1，VP2和VP3上，通過中和單克隆抗體反應模式已經確定了4個中和抗原的位點，這樣的定位已經被高分辨率X涉嫌晶體學所證實。