[發(fā)明專利]海水中16種脂溶性貝類毒素的液質(zhì)聯(lián)用檢測方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210388457.5
• 申請日: 2012-10-15
• 公開（公告）號: CN102928529A
• 公開（公告）日: 2013-02-13
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 譚志軍;吳海燕;郭萌萌;李兆新;王聯(lián)珠;翟毓秀
• 申請（專利權(quán)）人: 中國水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究所
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
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• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種脂溶性貝類毒素的檢測方法，特別是一種海水中16種脂溶性貝類毒素的液質(zhì)聯(lián)用檢測方法。?

背景技術(shù)

海洋生物毒素(貝類毒素)特指主要由海洋有毒微藻或微生物產(chǎn)生、能夠在海洋生物尤其是雙殼貝類中富集的、對其他生物包括人類產(chǎn)生危害的一大類小分子有毒化學(xué)物質(zhì)。針對這些生物毒素，研究者初期主要根據(jù)所引起的中毒癥狀將其分為六大類：麻痹性貝類毒素(Paralytic?Shellfish?Poisoning，PSP)、腹瀉性貝類毒素(Diarrhetic?Shellfish?Poisoning，DSP)、神經(jīng)性貝類毒素(Neurotoxic?Shellfish?Poisoning，NSP)、記憶缺失性貝類毒素(Amnesic?Shellfish?Poisoning，ASP)、西加魚毒素(Ciguatera?Fish?Poisoning，CFP)、藍綠藻毒素。不過隨著研究的深入，新的生物毒素種類不斷被發(fā)現(xiàn)，且多種毒素如OA往往與毒素AZA和PTX伴生而成，但具有不同的致毒機理，原有分類方法已不能滿足管理和科研的需求。因此，2004年，由聯(lián)合國糧農(nóng)組織、世界衛(wèi)生組織和政府間海洋委員會共同組建的雙殼類軟體生物毒素工作組將貝類毒素分為八大類，分別為石房蛤毒素組(Saxitoxin，STX)、軟骨藻酸組(Domoic?acid，DA)、大田軟海綿酸毒素組(Okadaic?acid，OA)、原多甲酸毒素組(Azaspiracid，AZA)、短裸甲藻毒素組(Brevetoxin，BTX)、蛤毒素組(Pecenotoxins，PTX)、蝦夷扇貝毒素組(Yessotoxin，YTX)和環(huán)亞胺類毒素(Cyclic?imines，CIs)。除此之外，水螅毒素(Palytoxins，P1TX)和西加魚毒素(Ciguatoxins，CTX)也正在被考慮是?否劃作貝類毒素中。?

現(xiàn)有8大類貝類毒素中，STX和DA毒素組較易溶解于水，比較而言O(shè)A、AZA、BTX、PTX、YTX、CIs均為聚醚類物質(zhì)，具熱穩(wěn)定性，易溶解于甲醇、乙醚等非極性有機試劑中，因此被統(tǒng)一稱作為脂溶性貝類毒素(lipophilic?phycotoxins，LPs)。貝類毒素的嚴(yán)重危害性已引起多個國家的密切關(guān)注，以歐美加等為首的發(fā)達國家相繼制定了貝類毒素監(jiān)控國家計劃。傳統(tǒng)的監(jiān)控方法主要是定期對相關(guān)海域中的雙殼貝類進行貝類毒素的含量及產(chǎn)毒藻種類和數(shù)量進行監(jiān)測，以評估貝類毒素的風(fēng)險性，對保護消費者安全，確保貝類產(chǎn)業(yè)健康發(fā)展做出了積極貢獻。然而，傳統(tǒng)手段需要采集大量的貝類和藻類樣品才能對貝類毒素做出有效預(yù)警，不僅耗費大量的人力物力，而且時效性不強。2004年，MacKenzie等人首次報道了一種固相吸附毒素追蹤技術(shù)(Solid?phase?adsorption?toxin?tracking，SPATT)，主要是利用特異性吸附材料對目標(biāo)毒素進行吸附，然后實驗室內(nèi)洗脫、濃縮和凈化后經(jīng)LC-MS檢測。SPATT技術(shù)與傳統(tǒng)方法相比，不僅大量減少采樣分析工作量，而且還可以監(jiān)控目標(biāo)海域不同水層貝類毒素的變化，同時結(jié)合貝類中毒素和有毒藻的變化情況，對貝類毒素有早期預(yù)警作用，具有很大的發(fā)展前景。現(xiàn)有的檢測技術(shù)主要還是小鼠生物法，存在動物福利以及檢出限高且不能明確辨析貝毒成分等問題，雖然質(zhì)譜檢測技術(shù)也已開始用于貝類毒素的檢測，但檢測種類比較單一，或前處理方法尚需進一步完善。因此建立一種快速、靈敏、準(zhǔn)確的多種脂溶性貝類毒素同時檢測方法變得尤為重要。?

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種針對性強、操作簡單、檢測速度快、檢測面廣、降低了測試成本、易于推廣應(yīng)用的海水中16種脂溶性貝類毒素的液質(zhì)聯(lián)用檢測方法。?

本發(fā)明是通過以下的技術(shù)方案來實現(xiàn)的。?

一種海水中16種脂溶性貝類毒素的液質(zhì)聯(lián)用檢測方法，包括吸附袋的制作、吸附袋的使用、毒素萃取、測定條件與方式、定性測定和定量測定，具體步驟如下：?

(1)吸附袋的制作：用聚酯網(wǎng)布，縫制成布袋，裝入樹脂之后密封，在正方形布袋的一角固定尼龍掛扣，把吸附袋在甲醇中浸泡，然后用蒸餾水浸泡去除甲醇，隨即放入密封的塑料袋中，在4℃條件下短時間保存，待用；?

(2)吸附袋的使用：把吸附袋系在長繩上，分上、中、下三層，層間隔至少超過5米以上，否則相應(yīng)減少層數(shù)，每層一次固定3個及以上吸附袋，將繩系于固定位置的漂浮桿上，每間隔7-10天將吸附袋取出，再放入新的吸附袋，提取的吸附袋用蒸餾水沖洗，放入預(yù)先編號的塑料袋中，在4℃條件下短時間保存；?