[發明專利]一種從香鱗毛蕨中分離純化四種間苯三酚類化合物的方法

無效

• 申請號: 201210382918.8
• 申請日: 2012-10-11
• 公開（公告）號: CN103102255A
• 公開（公告）日: 2013-05-15
• 發明（設計）人: 付玉杰;高暢;李娜;李吉;趙春健;李春英;張東陽
• 申請（專利權）人: 東北林業大學;付玉杰
• 主分類號: C07C45/78
• 分類號: C07C45/78;C07C49/84;C07C49/723
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1.本發明涉及一種從香鱗毛蕨中分離純化四種間苯三酚類化合物的方法，其特征在于，具體步驟如下：

(1)誘導：以干燥的香鱗毛蕨為原料，通過勻漿誘導技術和酶水解技術得到固體物質；

(2)提取：將誘導后的固體物質通過以乙醇為溶劑，采用超聲波輔助、冷浸、負壓空化、微波輔助的方法提取，誘導液及乙醇提取液合并濃縮后通過超聲波振蕩絮凝技術得到絮凝物，將絮凝物經負壓空化混懸液固萃取技術萃取；

(3)分離：將萃取得到溶液濃縮后通過大孔吸附樹脂柱色譜富集技術、凝膠分離技術及正相硅膠中壓柱層析分離技術后得到綿馬酚、綿馬素PB、香鱗毛蕨素和綿馬素BB粗品；

(4)結晶：將綿馬酚、綿馬素PB、香鱗毛蕨素和綿馬素BB的粗制品經過低溫析晶和重結晶技術得到純度大于95％的純品。

2.按照權利要求1步驟（1）所述的勻漿誘導技術，其特征在于：勻漿誘導所用的溶劑為水，溫度30-50℃，體積為固體質量的3-6倍，連續勻漿誘導3次，每次5-15min。

3.按照權利要求1步驟（1）所述的酶水解技術，其特征在于：在提取過程中使用酶對新鮮或干燥的香磷毛蕨進行水解，將勻漿誘導后的漿液用檸檬酸、冰醋酸或鹽酸調PH為3.0-6.0；取0.2-3％固形物重量的纖維素酶和果膠酶的復合酶，溶于pH為3.0-6.0的緩沖液中，在40-60℃水浴中激活8-15min，將激活后的復合酶緩沖液加入勻漿誘導漿液中，在溫度為30-50℃的水浴中酶解3-5h。

4.按照權利要求1步驟（2）所述的乙醇提取液，其特征在于：乙醇提取液所提物質為勻漿誘導和酶水解后的固形物，提取方法為超聲波輔助提取、冷浸提取、負壓空化提取和微波輔助提取，所用溶劑為60-85％乙醇。

5.按照權利要求1步驟（2）所述的超聲波振蕩絮凝技術，其特征在于：將香鱗毛蕨乙醇提取物置于溫度為40-50℃的水中，體積為提取物體積的6-8倍，超聲波振蕩絮凝時間為15-20min，頻率為80-100kHz，靜置時間為10-20min。

6.按照權利要求1步驟（2）所述的負壓空化混懸液固萃取技術，其特征在于：對粘稠絮凝物進行負壓空化混懸液固萃取，所用溶劑包括乙酸乙酯、正己烷、三氯甲烷和正丁醇，萃取所用的溶劑體積為提取物質量的0.05-0.1倍，萃取次數為3-5次，所用的壓力為-0.05Mpa。

7.按照權利要求1步驟（3）所述的大孔吸附樹脂柱色譜富集技術，其特征在于：將樹脂填充到玻璃柱中，使之形成以樹脂為填料的層析柱，所用樹脂包括H1020、H103、D101、D3520、HPD-D、FL-3、AL-1、AB-8、HPD-826、HPD-600、NKA2或FL-1廣譜性大孔吸附樹脂，該方法操作步驟為：預先稱取質量為樣品量6-8倍的樹脂，采用濕法裝柱，保留液面，將負壓空化混懸液固萃取所得到的固形物加入到乙醇中，充分攪拌溶解后，加入2-5倍量樹脂，40-50℃條件下加熱至乙醇揮干，樣品完全吸附在樹脂上，然后將拌樣樹脂加載到預置的樹脂柱頂層，加入乙醇-水溶液梯度洗脫，具體包括用5-20BV體積分數10%-30%的乙醇溶液洗脫雜質，10-50BV體積分數50%-95%的乙醇溶液依次洗脫組份，收集洗脫液，濃縮至干。

8.按照權利要求1步驟（3）所述的凝膠分離技術，其特征在于：所用樣品為樹脂富集后所得固形物，所用凝膠為SephadexLH-20凝膠，將大孔吸附樹脂富集的50%-95%部分分別濃縮，并將產物用2%-8%甲醇溶解，配制成料液濃度為5-20mg/mL的樣品液，經0.45μm濾膜過濾后，按照100-150mg樣品/mL凝膠，注入Sephadex?LH-20凝膠柱，用水-甲醇體系梯度洗脫，先用20%甲醇2-5倍柱體積洗脫、然后用40%-70%甲醇3-7倍柱體積洗雜質、最后用80%-90%甲醇4-7倍柱體積洗脫，收集洗脫液。