[發明專利]一種三段式二維液相色譜系統及其使用方法

無效

• 申請號: 201210381469.5
• 申請日: 2012-10-10
• 公開（公告）號: CN102879498A
• 公開（公告）日: 2013-01-16
• 發明（設計）人: 張維冰;邵平;戈兆松;劉翻;張權青
• 申請（專利權）人: 蘇州匯通色譜分離純化有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/60
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及制備液相色譜系統領域。具體地說，是一種三段式二維液相色譜系統及其使用方法。

技術背景

液相色譜是以獲取純樣品為目的的一種分離技術，自20世紀30年代應用于色素的分離至今，得到了長足發展。20世紀80年代高效制備液相色譜在醫藥工業中有了迅速的發展，90年代在蛋白質的分離純化上得到了大量應用。如今，制備色譜幾乎在社會生產生活的各個領域均有應用，如次生類代謝產物、天然產物、大分子化合物及某些重要的藥用生物活性蛋白、生物治療品與診斷試劑的分離純化。但是，與分析色譜相比，制備液相色譜分離效率不高，不能滿足高純度、高產量的需求。于是，人們致力尋找一種高分離效率的制備色譜模式，降低生產成本，得到高純的樣品。進樣量與分離效率是液相制備色譜的兩個重要指標，而進樣量增加，會降低分離效率。為了同時兼顧進樣量和分離效率，曾有人提出將一根大內徑柱與一根小內徑柱串聯，其認為前面大內徑柱能提供大得柱容量，后面小內徑柱提供有效的分離。但是結果表明該方法不是一個有效的途徑。2005年，關亞風等發明了一種內徑逐漸縮小的錐形柱，選擇合適的錐角使色譜譜帶流型接近篩子狀流型，其上樣量大的同時能有效提高柱效。但是該色譜柱提高的柱效有限，對一些復雜物質分離效果不盡人意。

在制備色譜中，離線二維系統也是一種提高系統分離能力的有效手段，其操作是首先將樣品用低壓制備液相色譜粗分，將收集的洗脫液濃縮后，再以中、高壓液相色譜分離。這種方法操作復雜費時費力，且浪費大量溶劑，生產成本高。而使用六通閥的捕集柱模式在線二維制備液相色譜系統也因其自動化程度高，分離能力強也得到應用。至今還沒有人將三個中低壓的液相色譜柱有機結合起來構建成在線的二維制備色譜系統，并用于規模化制備生產。

發明內容

本實發明的目的在于克服現有技術的不足，提供一種三段式二維制備液相色譜系統，并詳細介紹了該系統的使用方法。

本發明的目的是通過以下技術方案實現的：一種三段式二維液相色譜系統，包括第一維分離檢測系統及第二維分離檢測系統，所述第一維分離檢測系統包括第一色譜柱、第二色譜柱、第一輸液裝置、第一檢測器、第一三通閥及第二三通閥；所述第二維分離檢測系統包括第二色譜柱、第三色譜柱、第二輸液裝置、第二檢測器及第二三通閥、第三三通閥；所述第一三通閥連接第二三通閥；

其中，第一色譜柱通過第一三通閥及第二三通閥連接第二色譜柱，第二色譜柱通過第三三通閥連接第三色譜柱；第一輸液裝置連接第一色譜柱的進樣端；第一三通閥連接第一檢測器，第二三通閥連接第二輸液裝置，第三色譜柱的出樣端連接第二檢測器。

優選的，所述第一色譜柱、第二色譜柱及第三色譜柱內均填充有固定相，所述第二色譜柱與第三色譜柱內的固定相相同，所述第一色譜柱內的固定相異于第二色譜柱及第三色譜柱內的固定相。

優選的，所述第一色譜柱、第二色譜柱及第三色譜柱之間均為連通式連接，固定相能夠自由通過第一三通閥、第二三通閥及第三三通閥。本發明中所述的連通式連接，是指三個色譜柱之間的連接處未設有篩板，以方便前一色譜柱為后一色譜柱補充填料。而色譜柱與其他部件連接的接口上均設有篩板，防止填料流失。

進一步的，所述固定相為反相填料、正相填料、離子交換樹脂填料、手性填料及親和填料中的一種或兩種。

優選的，所述第一輸液裝置由兩個輸液泵組成，所述第二輸液裝置由兩個輸液泵組成。

進一步的，所述第一色譜柱、第二色譜柱及第三色譜柱均采用圓柱形色譜柱、色譜塔或色譜球中的一種。

優選的，所述的三段式二維液相色譜系統，還包括廢液回收裝置。所述廢液回收裝置可采用耐腐蝕的廢液桶或其他容器。

本發明中所述的第一檢測器及第二檢測器均采用紫外分析檢測器。

本發明的一種三段式二維液相色譜系統的使用方法，包括如下步驟：

步驟1、初始狀態，第一色譜柱與第二色譜柱斷開，第一色譜柱連通第一檢測器；切換第三三通閥將第二色譜柱與第三色譜柱斷開；運行第一輸液裝置，使樣品進入第一色譜柱并在第一色譜柱中進行分離，由第一檢測器對樣品分離情況進行實時監測；

步驟2、當目標物從第一色譜柱洗脫下來時，通過切換第一三通閥、第二三通閥將第一色譜柱與第二色譜柱連接，目標物在第二色譜柱內吸附，洗脫目標物的流動相則由第二色譜柱的柱尾流入廢液回收裝置；

步驟3、切換第一三通閥、第二三通閥及第三三通閥，將第二色譜柱與第一色譜柱斷開，第二色譜柱連接第三色譜柱，運行第二維分離檢測系統，對目標物進行第二維分離，目標物由第二檢測器在第三色譜柱的出樣端進行檢測后收集；