[發明專利]一種高特異高敏感檢測食源性致病性耶爾森氏菌的方法

無效

• 申請號: 201210380459.X
• 申請日: 2012-10-10
• 公開（公告）號: CN103725752A
• 公開（公告）日: 2014-04-16
• 發明（設計）人: 金京勛;呂少波;李蘇楊
• 申請（專利權）人: 蘇州四同醫藥科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/04;C12R1/01
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 曹毅

1.一種高特異高敏感檢測食源性致病性耶爾森氏菌的方法,其特征在于，包括以下步驟：

步驟1）制備反應液

反應液組成及含量為

8u/ul?Bst核酸聚合酶??????????????????????????8u

10X耐熱聚合酶反應緩沖液?????????????????1X，MgSO4?2mM

4M?甜菜堿????????????????????????????????????1M

10mM?d-NTP混合液????????????????????????????400μM

內引物

???Y-FIP???????????????????????????????????40umol

???Y-BIP???????????????????????????????????40umol

外引物

???Y-F3????????????????????????????????????5umol

???Y-B3????????????????????????????????????5umol

標本核酸????????????????????????????????????20ng

添加焦碳酸二乙酯處理水至總量達到25ul;

步驟2）將上述反應液放入63℃烘箱進行反應30-60min，渾濁為陽性;

步驟3）提取臨床分離空腸耶爾森氏菌，大腸耶爾森氏菌，以及若干臨床分離金黃色葡萄球菌、頭皮葡萄球菌、人型葡萄球菌、表皮葡萄球菌、草綠色鏈球菌、大腸桿菌、克雷伯菌的核酸，多次進行反應，觀察它們的陰陽性。

2.根據權利要求1所述的高特異高敏感檢測食源性致病性耶爾森氏菌的方法，其特征在于：所述外引物Y-F3的序列為TCTCACACACTAAAAACTGC。

3.根據權利要求2所述的高特異高敏感檢測食源性致病性耶爾森氏菌的方法，其特征在于：所述外引物Y-B3的序列為ACCATATGGCTGGAACAAG。

4.根據權利要求3所述的高特異高敏感檢測食源性致病性耶爾森氏菌的方法，其特征在于：所述內引物Y-FIP的序列為

TTGATTCGATTCACGGATTGCTTT-AAATAGCTATACCGATGTGACT。

5.??根據權利要求4所述的高特異高敏感檢測食源性致病性耶爾森氏菌的方法，其特征在于：所述內引物Y-BIP的序列為ATTCCGTCAACTTGACAACCG-TGAACTGGCTAAACCTTTGT。

6.根據權利要求5所述的高特異高敏感檢測食源性致病性耶爾森氏菌的方法，其特征在于：所述反應液中加入熒光顯示物質溴化乙錠、鈣黃綠素進行實時檢查。

7.根據權利要求6所述的高特異高敏感檢測食源性致病性耶爾森氏菌的方法，其特征在于：所述食源性致病性耶爾森氏菌包括空腸耶爾森氏菌和大腸耶爾森氏菌。