[發明專利]一種從板藍根中高效提取、分離和純化表告伊春的方法

無效

• 申請號: 201210379452.6
• 申請日: 2012-10-09
• 公開（公告）號: CN103113319A
• 公開（公告）日: 2013-05-22
• 發明（設計）人: 付玉杰;羅猛;焦驕;蓋慶巖;魏福堯;李吉;彭霄
• 申請（專利權）人: 東北林業大學;付玉杰
• 主分類號: C07D263/16
• 分類號: C07D263/16
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及從藥用植物中高效提取、分離和純化功能性成分的一種方法，具體是從傳統中藥材板藍根中高效提取、分離和純化抗病毒活性成分表告伊春的方法，屬于天然產物提取、分離和純化領域。

背景技術

板藍根是一種常用的傳統中藥材，首載于我國第一部本草著作《神農本草經》，《中華人民共和國藥典》(2010版)明確規定為十字花科植物菘藍(Isatis?indigotica?Fort.)的干燥根，主產于我國河北、安徽、江蘇、河南、黑龍江等省，具有清熱解讀，涼血利咽之功效，用于溫毒發斑，舌絳紫暗，痄腮，喉痹，爛喉丹痧，大頭瘟疫，丹毒，癰腫等。現代藥理研究證實，板藍根具有抗病毒、抗內毒素、免疫調節、抗腫瘤、抗菌、抗炎、活血化瘀等眾多活性。其中，板藍根的抗病毒活性非常顯著，板藍根生藥及其相關制劑對于流感病毒、呼吸道合胞病毒、腮腺炎病毒、單純皰疹病毒、乙型腦炎病毒、乙型肝炎病毒、腎綜合征出血熱病毒、柯薩奇B4病毒、偽狂犬病病毒等各種病毒具有不同程度的抑制作用。板藍根作為廣泛應用于臨床的抗病毒天然植物藥材，對其抗病毒活性成分的提取、分離和純化具有十分重要的市場價值。

國內外相關文獻報道生物堿為板藍根的主要活性成分，表告伊春(Epigoitrin)作為其中一種主要的含硫生物堿，具有顯著的抗病毒活性，是目前評價板藍根生藥及其相關制劑質量的重要指標成分(徐麗華等,中國天然藥物,2005,3(6):359-360;Huang,Q.S.,et?al.,Plant?Medica,1981,42(3):308-310)。

目前從板藍根中提取表告伊春主要采用傳統的技術手段，如煎煮法、浸漬法、滲漉法、熱回流法等，這些方法都是在完整細胞的情況下，通過浸潤與滲透，使提取溶劑進入組織細胞，溶解胞內活性物質并使其擴散至提取溶劑之中。由于細胞壁的屏障作用，使得中藥材有效成分的提取效率有一定的限度。同時這些提取方法存在提取溫度過高，耗時長、能源利用率低、提取出的雜質多、后續處理繁瑣等缺點。

中國專利申請號200410016902.0和200710011038.9分別公開了一種表告伊春純品的制備方法，是以中藥材板藍根為原料，通過提取、富集、分離和純化等步驟得到表告伊春。前者采用95%乙醇回流提取，成本過高，提取率極低，同時以高毒性的氯仿和甲醇作為洗脫液通過中性氧化鋁柱層析得到目標物，安全隱患大。后者利用水煎煮提取，操作溫度高，對目標成分破壞大，提取率低下，且以價格高昂的色譜甲醇為洗脫液采用高效液相制備手段純化表告伊春，成本過高，制備量小，無法實現工業化大規模生產。

綜上所述，傳統的提取、分離和純化表告伊春的技術工藝不能達到高效利用板藍根資源和獲得高得率、高純度的表告伊春的目的。因此有必要尋求一種簡便、安全、經濟、高效的提取、分離和純化表告伊春的方法，促進對板藍根資源的深度開發和利用，為抗病毒新藥開發提供積極有利條件。本發明旨在建立一種通過現代生物誘導的提取技術和分離純化技術相結合的方法，實現從板藍根中高效提取、分離和純化高純度表告伊春的方法。

發明內容

本發明的目的在于提供一種以中藥板藍根為原料，通過勻漿破碎酶解技術，酶輔助負壓空化提取技術，絮凝除雜技術，大孔吸附樹脂富集分離技術，溶劑抽提純化技術，正相硅膠中壓柱層析技術以及低溫析晶和重結晶技術等一系列高效提取、分離和純化技術實現簡單、快速、大量的獲得高純度表告伊春單體成分。

本發明所采用的技術方案：將中藥板藍根和配制好的酶溶液混合，轉移入勻漿-負壓空化提取器中，進行勻漿破碎酶解和酶輔助負壓空化提取，經過勻漿破碎、外源酶水解細胞壁、內源酶生物轉化以及負壓空化的高效提取，增強了表告伊春在粗提物中的含量，然后經過絮凝除雜、大孔吸附樹脂富集分離、溶劑抽提純化、正相硅膠中壓柱層析后得到表告伊春產品，經過低溫析晶和重結晶后得到純度大于98%的精制產品。具體方案如下：

(1)勻漿破碎酶解：配制濃度為250~500U/mL的酶溶液，加入檸檬酸緩沖溶液調節pH值至4.0~5.0，將酶溶液和板藍根藥材以溶液體積與原料質量比為30~50mL/g混合，連續勻漿1~3次，每次1~3min。

(2)酶輔助負壓空化提取：將含有酶的勻漿液自動導入負壓空化提取裝置中，在溫度為35~45°C，壓力為0.07~0.09Mpa下，連續負壓空化提取，每次60~90min,提取1~3次。