[發(fā)明專利]一種miR-222的靶基因結(jié)合序列

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210378376.7
• 申請(qǐng)日: 2012-09-29
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103484453A
• 公開(kāi)（公告）日: 2014-01-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 馬杰;李奇峰;沈克;許佳明
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬新華醫(yī)院
• 主分類號(hào): C12N15/11
• 分類號(hào): C12N15/11;C12N15/63;C12N5/10;C12Q1/68;C12Q1/02
• 代理公司: 上海天翔知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31224
• 代理人: 呂伴

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種miR-222的靶基因結(jié)合序列、重組載體、轉(zhuǎn)化體及其用途。

背景技術(shù)

自從1993年Lee等在秀麗新小桿線蟲(chóng)內(nèi)首次發(fā)現(xiàn)miRNA編碼基因lin-4、2000年Reinhart等在對(duì)線蟲(chóng)的發(fā)育調(diào)控中發(fā)現(xiàn)let-7以來(lái)，人們相繼在煙草、果蠅、線蟲(chóng)、斑馬魚(yú)、哺乳動(dòng)物與人體中發(fā)現(xiàn)并且鑒定幾百種miRNA編碼基因。

miRNAs是一種廣泛存在的對(duì)基因進(jìn)行微調(diào)的分子，約占人類基因組的總基因數(shù)2-3％。從結(jié)構(gòu)上來(lái)說(shuō)，miRNAs(microRNAs)是一類長(zhǎng)度很短的非編碼調(diào)控單鏈小分子RNA，約18-24bp，通過(guò)與其靶mRNA分子的3端非編碼區(qū)域(3’UTR)互補(bǔ)配對(duì)而在轉(zhuǎn)錄后水平上對(duì)基因的表達(dá)進(jìn)行負(fù)調(diào)控，導(dǎo)致mRNA的降解或翻譯抑制，從而進(jìn)一步調(diào)控多種生物學(xué)行為，如發(fā)育的進(jìn)程、干細(xì)胞分化、細(xì)胞凋亡、疾病、以及腫瘤發(fā)生。

最初對(duì)miRNA表達(dá)變化的探討來(lái)自于對(duì)B細(xì)胞慢性淋巴性白血病(CLL)的研究，其后，眾多研究小組在多種人類腫瘤中檢測(cè)到miRNA的表達(dá)變化，因此被認(rèn)為是發(fā)生癌變的共同特征，但是癌癥的腫瘤的形成和miRNA表達(dá)變化究竟是誰(shuí)因誰(shuí)是果尚還沒(méi)有明確的實(shí)驗(yàn)證據(jù)。大約50%得到注解的miRNA在基因組上定位于與腫瘤相關(guān)的脆性位點(diǎn)（fragile?site），這說(shuō)明miRNA在腫瘤發(fā)生過(guò)程中起至關(guān)重要的作用。另外，在采用基因芯片技術(shù)對(duì)來(lái)自多種腫瘤組織樣本的miRNA表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，一些miRNA表達(dá)下調(diào)，而另一些miRNA表達(dá)上調(diào)，這些miRNA所起的作用類似于抑癌基因和癌基因的功能，有研究人員將miRNA命名為“oncomirs”。

研究表明，miR-222（Homo?sapiens?miR-222）在肝癌、前列腺癌組織及胃癌、膠質(zhì)瘤細(xì)胞中表達(dá)上調(diào)［Wong?QW,Ching?AK,Chan?AW,et?al.[J].ClinCancer?Res,2010,16(3):867-875；Chun-Zhi?Z,Lei?H,An-Ling?Z,et?al.[J].BMC?Cancer,2010,10:367；Galardi?S,Mercatelli?N,Farace?MG,et?al.[J].Nucleic?Acids?Res,2011,39(9):3892-3902］

因此，明確miR-222的靶基因結(jié)合序列，對(duì)今后開(kāi)發(fā)其抑制劑具有重要意義，將大大促進(jìn)miRNA在腫瘤預(yù)防、診斷和治療中的應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供miR-222的靶基因結(jié)合序列，為今后開(kāi)發(fā)其抑制劑藥物提供高效的、大通量的篩選和評(píng)價(jià)平臺(tái)和手段。

為此，本發(fā)明公開(kāi)了一種含有如SEQ?ID?NO.1所述核酸序列的miR-222的靶基因結(jié)合序列。

在一些實(shí)施例中，所述靶基因結(jié)合序列為如SEQ?ID?NO.2所述核酸序列。

在一些實(shí)施例中，所述靶基因結(jié)合序列為為如SEQ?ID?NO.3所述DKK2基因3’UTR核酸序列。

另一方面，本發(fā)明公開(kāi)了一種包含本發(fā)明所述靶基因結(jié)合序列的重組載體。

在一些實(shí)施例中，所述重組載體含有螢火蟲(chóng)熒光素酶或海洋腔腸熒光素酶報(bào)告基因。

在一些實(shí)施例中，所述重組載體為pGL3-promoter載體。

另一方面，本發(fā)明公開(kāi)了一種包含本發(fā)明所述重組載體的轉(zhuǎn)化體。

在一實(shí)施方式中，所述轉(zhuǎn)化體為U87膠質(zhì)瘤細(xì)胞。

另一方面，本發(fā)明公開(kāi)了本發(fā)明所述轉(zhuǎn)化體在篩選miR-222抑制劑中用途。

本發(fā)明公開(kāi)了miR-222的靶基因結(jié)合序列，為今后開(kāi)發(fā)其抑制劑藥物提供高效的、大通量的篩選和評(píng)價(jià)平臺(tái)和手段，將大大促進(jìn)miRNA在腫瘤預(yù)防、診斷和治療中的應(yīng)用。

附圖說(shuō)明

圖1pGL3-promoter質(zhì)粒酶切圖。

圖2PCR凝膠電泳圖。

圖3雙熒光酶活性檢測(cè)。

具體實(shí)施方式

本發(fā)明還包括通過(guò)合成和重組技術(shù)生產(chǎn)本發(fā)明miR-222的靶基因結(jié)合序列（多核苷酸）的方法。通過(guò)本領(lǐng)域已知的方法可以分離和純化多核苷酸（DNA或RNA）、載體、轉(zhuǎn)化體和生物體。