[發(fā)明專利]一種黑麥草內(nèi)酯的提取純化方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210371232.9
• 申請日: 2012-09-29
• 公開（公告）號: CN102827119A
• 公開（公告）日: 2012-12-19
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉東鋒;萬冬梅
• 申請（專利權(quán)）人: 南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司
• 主分類號: C07D307/83
• 分類號: C07D307/83
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于中藥制藥領(lǐng)域，涉及一種黑麥草內(nèi)酯的提取純化方法。

背景技術(shù)

黑麥草內(nèi)酯（Loliolide），分子式為C₁₁H₁₆O₃，分子量196.25，為針狀結(jié)晶，是從忍冬科(Caprifoliaceae)莢蒾Viburnum?dilatatum?Thunb.的葉中分離得到的單萜化合物。藥理研究表明，黑麥草內(nèi)酯具有中等免疫抑制活性，在本品10μg/ml濃度時，對小鼠T-淋巴細胞增生抑制率為27.2%，對B-淋巴細胞增生抑制率為8.1%；黑麥草內(nèi)酯具有強的細胞毒活性，對艾氏腹水瘤的ED50為0.5μg/ml。

目前，國內(nèi)尚未見黑麥草內(nèi)酯的萃取純化方法方面的專利報道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明旨在克服上述技術(shù)缺陷，提供一種分離效果好、收率高、產(chǎn)品純度好，適合工業(yè)化生產(chǎn)的黑麥草內(nèi)酯的提取純化方法。

為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：

一種黑麥草內(nèi)酯的提取純化方法，其特征是：以莢蒾葉為原料，采用亞臨界流體萃取，控制萃取壓力為6-9MPa，萃取溫度為38-55℃，通入丙烷，靜態(tài)萃取25min后動態(tài)萃取30-80min，所得萃取物進行高壓硅膠柱層析，用石油醚-丙酮梯度洗脫，薄層層析，收集含黑麥草內(nèi)酯的組分，濃縮成浸膏后用甲醇溶解，經(jīng)制備型液相色譜進行純化，甲醇水溶液進行洗脫，濃縮相應(yīng)組分，放置結(jié)晶，二氯甲烷-甲醇重結(jié)晶即得黑麥草內(nèi)酯。

所述丙烷的流量為5-8g/min。

所述高壓硅膠柱的柱壓為2.2-3.2MPa，柱內(nèi)徑為150-250mm，層析柱徑高比為1:12-20，硅膠目數(shù)為100-300目，石油醚-丙酮體積比為100：7-25。

所述甲醇水溶液的體積百分比濃度為65-70%。

本發(fā)明的有益效果是：

1、本發(fā)明方法通過亞臨界流體萃取、柱層析及制備型液相色譜分離、重結(jié)晶等步驟制備黑麥草內(nèi)酯，耗時短，得率高，操作簡單，易于工業(yè)化生產(chǎn);

2、使用特制高壓柱層析，上樣量大，周期短，分離度好，產(chǎn)品純度高;

3、本發(fā)明為黑麥草內(nèi)酯的進一步開發(fā)利用提供藥理原料、理論和實踐支持。

具體實施方式:

本發(fā)明內(nèi)容通過以下的實施例作進一步的闡述，但并不限制本發(fā)明的范圍。

實施例1：

取干燥莢蒾葉粗粉5kg，裝入萃取釜中，通入丙烷流體，控制丙烷流量為8g/min，萃取壓力為8MPa，萃取溫度為48℃，靜態(tài)萃取25min后動態(tài)萃取80min，溶于丙烷的黑麥草內(nèi)酯在分離釜中減壓析出，所得萃取物用甲醇溶解濕法上樣至填料為300目硅膠高壓柱，其中高壓柱的柱壓為2.2MPa，柱內(nèi)徑為150mm，層析柱徑高比為1:18，以石油醚-丙酮的混合溶劑，依次按體積比100:10、100:15、100:20、100:25洗脫，分段收集各流分，將含黑麥草內(nèi)酯流分合并，減壓回收溶劑，加甲醇溶解，注入制備型液相色譜中，以70%的甲醇水溶液為流動相，流速為15ml/min，紫外檢測器在線監(jiān)測，檢測波長214nm，收集高純度黑麥草內(nèi)酯流分，濃縮，放置結(jié)晶，濾出結(jié)晶，用二氯甲烷-甲醇（5:1）重結(jié)晶即得黑麥草內(nèi)酯，HPLC檢測，含量為98.7%。

實施例2：

取干燥莢蒾葉粗粉5kg，裝入萃取釜中，通入丙烷流體，控制丙烷流量為8g/min，萃取壓力為7MPa，萃取溫度為55℃，靜態(tài)萃取25min后動態(tài)萃取30min，溶于丙烷的黑麥草內(nèi)酯在分離釜中減壓析出，所得萃取物用甲醇溶解濕法上樣至填料為200目硅膠高壓柱，其中高壓柱的柱壓為3.2MPa，柱內(nèi)徑為200mm，層析柱徑高比為1:12，以石油醚-丙酮的混合溶劑，依次按體積比100:7、100:15、100:20、100:24洗脫，分段收集各流分，將含黑麥草內(nèi)酯流分合并，減壓回收溶劑，加甲醇溶解，注入制備型液相色譜中，以65%的甲醇水溶液為流動相，流速為25ml/min，紫外檢測器在線監(jiān)測，檢測波長214nm，收集高純度黑麥草內(nèi)酯流分，濃縮，放置結(jié)晶，濾出結(jié)晶，用二氯甲烷-甲醇（5:1）重結(jié)晶即得黑麥草內(nèi)酯，HPLC檢測，含量為98.4%。

實施例3：