[發明專利]一種二元等離子納米粒子位點特異性自組裝的方法

無效

• 申請號: 201210369648.7
• 申請日: 2012-09-29
• 公開（公告）號: CN102825261A
• 公開（公告）日: 2012-12-19
• 發明（設計）人: 王利兵;胥傳來;徐麗廣
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: B22F9/24
• 分類號: B22F9/24;B22F1/00
• 代理公司: 無錫市大為專利商標事務所 32104
• 代理人: 時旭丹;劉品超

1.一種二元等離子納米粒子位點特異性自組裝的方法，其特征在于包括金納米粒子合成，金納米棒合成，金納米粒子修飾DNA1，金納米棒修飾DNA2，DNA復合連接臂的形成，金納米棒和金納米粒子組裝及表征，工藝步驟：

（1）金納米粒子合成

金納米粒子合成采用檸檬酸三鈉還原三水合四氯金酸合成18nm的金納米粒子：潔凈的三角燒瓶中加入95mL的超純水，而后向超純水中加入5mL的濃度為2g/L的三水合四氯金酸，加熱，煮沸，緊接著加入2.5mL新鮮配制的質量濃度1%的檸檬酸三鈉溶液，邊加熱邊攪拌，溶液顏色從淡黃色變成紅色，持續沸騰反應10min；最后，溶液冷卻至室溫，稀釋到100mL，4℃保藏，即制得18nm的金納米粒子溶液；

（2）金納米棒合成

金納米棒合成采用晶種生長法合成16nm×50nm的金納米棒：

晶種合成：28℃下0.1mL的2g/L的三水合四氯金酸溶液加入到1mL的0.2M的十六烷基三甲基溴化銨溶液中，溶液顏色由無色變成黃褐色，然后加入0.12mL新配制的0.01M硼氫化鈉溶液快速攪拌2min，溶液顏色即由黃褐色變為淺棕色；

②金納米棒生長：種子溶液合成好以后，進行金納米棒的生長，5mL的2g/L的三水合四氯金酸溶液加入到5mL的0.2?M十六烷基三甲基溴化銨溶液中，加入4mL的超純水，混勻；0.125?mL的0.01M硝酸銀溶液加入到上述混合體系中，混勻；隨后將65μL的0.1M抗壞血酸溶液加入上述體系溶液，28℃下攪拌反應2?min，溶液由褐色變成無色；最后，加入0.05mL的晶種溶液輕柔攪拌混勻20s，28℃反應4h，即得金納米棒溶液；

（3）金納米粒子修飾DNA1

步驟（1）合成出來的金納米粒子和巰基修飾的DNA1進行偶聯形成金納米粒子-DNA1復合物：

⑴將步驟（1）制備的10mL的金納米粒子10000r/min離心10min，沉淀用1mL的水分散，10000r/min離心10min棄上清，用1mL含0.01%SDS的pH8.0的0.01M的PBS緩沖液分散，4℃保藏、待用；

⑵取上述⑴制備好的金納米粒子100μL，加入12μL?100μM的DNA1，混勻，振搖反應20min后，用含0.01%SDS和2M的NaCl的pH8.0的0.01M的PBS緩沖液加至反應體系中，使NaCl濃度達到50mM，超聲10s，振搖反應20min后繼續加入該緩沖液至反應體系中，使NaCl濃度達到100mM，隨后按照NaCl濃度每增加100?mM的梯度重復上述反應過程至體系中NaCl濃度達到0.7M時，室溫振搖反應12h；

⑶將上述步驟⑵中反應溶液在8000r/min離心10min，棄上清，后用100μL的0.01%的SDS分散沉淀，后用0.01%的SDS的溶液清洗一次，4℃保藏、得金納米粒子-DNA1復合物，待用；

（4）金納米棒端面修飾DNA2

步驟（2）合成的金納米棒通過一定量的巰基修飾的DNA2修飾到金納米棒的端面形成金納米棒-DNA2復合物：

取步驟（2）制備好的金納米棒10μL加入1μL的10μM的DNA2，混勻，室溫振搖反應12h，6000r/min離心6?min，棄上清，用10μL的水分散，水洗一次，4℃保藏，得金納米棒-DNA2復合物，待用；

（5）DNA復合連接臂的形成

通過加入相應的單鏈DNA在雜交緩沖液中相互雜交形成DNA復合連接臂以控制金納米粒子和金納米棒的位點特異性組裝；所用DNA為DNA3和DNA4；分別取5μL的1μM的DNA3和DNA4，加入15μL的含20mM?MgCl₂和0.01%?SDS的pH?7.5、0.01M的Tris-HCl雜交緩沖液中，混勻，靜置反應12h，4℃保藏、待用；

（6）金納米棒和金納米粒子組裝及表征

分別取步驟（3）中制備的金納米粒子-DNA1復合物5μL，步驟（4）制備的金納米棒-DNA2復合物10μL和步驟（5）制備的DNA復合連接臂0.6μL，加入到16μL的含20mM?MgCl₂和0.01%的SDS的pH?7.5、0.01M的Tris-HCl雜交緩沖液中，混勻，靜置反應12h；在雜交緩沖液中組裝形成金納米粒子組裝到金納米棒的端面；

采用TEM對該組裝產物進行表征；?

DNA1：5’-TAACAATAAT?CCCTCAAAAA?AAAAA-SH-3’，

DNA2：5’-CGTTAGGACT?TACGCAAAAA?AAAAA-SH?-3’，

DNA3：5’-GAGGGATTAT?TGTTACGTTA?GGACTTACGC?AAAAAAAAAA?-NH₂-3’，

DNA4：5’-GCGTAAGTCC?TAACG?-3’。