[發明專利]兩面針組織培養培養基

有效

• 申請號: 201210364900.5
• 申請日: 2012-09-26
• 公開（公告）號: CN102884981A
• 公開（公告）日: 2013-01-23
• 發明（設計）人: 時群;陳麗文;吳紅英;陳乃明;何貴整;鄧月梅;梁小娟;譚冬曉;蔡林;梁剛;謝云
• 申請（專利權）人: 欽州市林業科學研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 桂林市持衡專利商標事務所有限公司 45107
• 代理人: 湯凌志

技術領域

本發明涉及組織培養基，尤其涉及一種兩面針組織培養培養基。

背景技術

兩面針（Zanthoxylum?nitidum），為蕓香科植物，因其葉片中脈兩面均有小鉤刺，故稱“兩面針”，又名兩背針、釘板刺（福州）、入山虎、麻藥藤、入地金牛、葉下穿針、紅倒鉤筋、大葉描爪簕(廣東、廣西)。兩面針喜生長在溫熱、陽光充足的地方，山地、丘陵、平地的疏林、灌叢中、荒山草坡的有刺灌叢中較常見，主要分布在我國廣東、廣西、福建、海南、云南、貴州及臺灣等地。兩面針是我國較常用的一種中藥材，根莖、葉、果皮均可入藥，有活血、散瘀、鎮痛、消腫等功效。現代藥用化學研究表明：兩面針的根莖含有生物堿oxynitidine，N-demethoxychelerythrone，dihydronitidine，skimmianine，6-ethoxychelerythrine，α-allocryptopine，nitidine等。局部應用時，對神經末梢有麻醉作用，且麻醉效果穩定，無不良反應，也無肝腎損害等，是一種具有廣闊藥用前景的中藥材，因此開展兩面針的基礎研究，具有十分重要的意義。

目前，國內已有一些兩面針組培技術初步研究報道，在培養基的選擇上一般采用基本培養基（MS）和生長調節劑的結合，但是兩面針種源產地不同，組織培養條件也不同，即使是同一產地的兩面針種源，選用不同單株作外植體，組織培養條件也不同。MS培養基適用于部分產地兩面針組織培養，部分產地兩面針種源和兩面針單株用MS培養基進行繼代培養，先葉片變黃、變白，繼而莖變黃、變白，芽苗死亡，無法繼續進行繼代培養。如果不同產地兩面針種源、或兩面針單株使用一種培養基，生產操作難度大，成本高，不利于規模化生產。

發明內容

本發明的目的是克服現有技術的不足，提供一種兩面針組織培養培養基，該培養基包括繼代培養基和生根培養基，其中：

每升（L）繼代培養基的組分及各組分的含量如下：

（1）大量元素：硝酸鉀1250mg/L、硝酸銨1000mg/L、七水硫酸鎂370mg/L、二水氯化鈣166mg/L、磷酸二氫鉀150mg/L、乙二胺四乙酸二鈉56.0mg/L、七水硫酸亞鐵41.7mg/L；

（2）微量元素：四水硫酸錳25mg/L、七水硫酸鋅10mg/L、硼酸10mg/L、二水鉬酸鈉0.25mg/L、碘化鉀0.083mg/L、五水硫酸銅0.025mg/L；

（3）有機物：肌醇100.0mg/L、甘氨酸2.0mg/L、鹽酸硫胺素（VB₁）0.5mg/L、鹽酸吡哆醇（VB₆）0.5mg/L、葉酸0.5mg/L、生物素（VH）0.05mg/L；

（4）植物生長調節劑：6-芐基腺嘌呤0.4～1.0mg/L、萘乙酸0.2～0.5mg/L；

余量為蒸餾水。

每升（L）生根培養基的組分及各組分的含量如下：

（1）大量元素：硝酸鉀1250mg/L、硝酸銨1000mg/L、七水硫酸鎂370mg/L、二水氯化鈣166mg/L、磷酸二氫鉀150mg/L、七水硫酸亞鐵33.4mg/L、乙二胺四乙酸二鈉44.8mg/L；

（2）微量元素：四水硫酸錳25mg/L、七水硫酸鋅10mg/L、硼酸10mg/L、二水鉬酸鈉0.25mg/L、碘化鉀0.083mg/L、五水硫酸銅0.025mg/L；

（3）有機物：肌醇100.0mg/L、甘氨酸2.0mg/L、鹽酸硫胺素（VB₁）0.5mg/L、鹽酸吡哆醇（VB₆）0.5mg/L、葉酸0.5mg/L、生物素（VH）0.05mg/L；

（4）植物生長調節劑：生根粉ABT6號0.4～0.8mg/L、萘乙酸0.2～0.4mg/L；

余量為蒸餾水。

本發明兩面針組織培養培養基中的繼代、生根培養基的配制方法為：

1母液配制

1.1為便于取樣，宜先配制各種母液，分為大量元素母液、微量元素母液、有機物母液和各種植物生長調節劑母液。蔗糖、瓊脂不宜配成母液，需要時直接稱樣；

1.2大量元素母液和有機物母液的各組分濃度應與培養基的組分濃度成10～100的倍數關系，微量元素母液成200～500的倍數關系，而植物生長調節試劑母液的濃度宜配成1mg/ml；

1.3母液選用無菌的蒸餾水、去離子水或超純水配制，大量生產時用煮沸過的水；