[發(fā)明專利]一種割罐法發(fā)酵生產(chǎn)韋蘭膠的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210364669.X
• 申請日: 2012-09-27
• 公開（公告）號(hào): CN103695498A
• 公開（公告）日: 2014-04-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李紅芬;梁軍軍;劉云
• 申請（專利權(quán)）人: 天津科百生物科技研發(fā)有限公司
• 主分類號(hào): C12P19/04
• 分類號(hào): C12P19/04;C12R1/05
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種割罐法發(fā)酵生產(chǎn)韋蘭膠的方法，其特征在于：依次步驟如下：

S1.菌種保藏斜面的制備：將產(chǎn)堿桿菌ATCC31555接種到培養(yǎng)基斜面上，于30℃恒溫培養(yǎng)2-4天待用；斜面培養(yǎng)基組成包括：蔗糖15g，酵母粉3g，蛋白胨5g，牛肉膏5g，瓊脂15g，用蒸餾水定容至1L，pH值7.0；所用菌種：鞘氨醇單胞菌ATCC31555；

S2.上述斜面用于接種至滅菌后的一級(jí)液體種子培養(yǎng)基中，一級(jí)液體種子培養(yǎng)基組成包括：葡萄糖15-20g，酵母粉4-8g，牛肉膏4-8g，蛋白胨3-6g，K₂HPO₄?2-3g，MgSO₄?0.01-0.03g，用蒸餾水定容至1L，pH值7.0；

將液體種子培養(yǎng)基于115℃、15min滅菌再冷卻；然后用接種環(huán)從菌種保藏斜面上挑1環(huán)菌體接入上述冷卻的液體種子培養(yǎng)基中，500ml規(guī)格的搖瓶裝液量是100ml，搖瓶于30℃、轉(zhuǎn)速為150rpm的搖床上培養(yǎng)24h，得到一級(jí)液體種子；

S3.上述一級(jí)液體種子用于接種至滅菌后的二級(jí)級(jí)液體種子培養(yǎng)基中，二級(jí)液體種子培養(yǎng)基組成包括：葡萄糖15-20g，酵母粉4-8g，蛋白胨3-6g，K₂HPO₄?2-3g，MgSO₄?0.01-0.03g，用蒸餾水定容至1L，pH值7.0；

將液體種子培養(yǎng)基于115℃、15min滅菌再冷卻；然后將一級(jí)液體種子按10％接種量接入上述冷卻的二級(jí)液體種子培養(yǎng)基中，500ml規(guī)格的搖瓶裝液量是100ml，搖瓶于28-38℃、轉(zhuǎn)速為120-200rpm的搖床上培養(yǎng)12-24h，得到二級(jí)液體種子；

S4.上述二級(jí)液體種子培養(yǎng)基用于接種至滅菌后的5L發(fā)酵罐中，發(fā)酵罐培養(yǎng)基組成包括：玉米淀粉水解液250-400ml，NaNO₃?3.0-4.0g，MgSO₄0.2-0.4g，K₂HPO₄?4.5-6.0g，CaCO₃?1.0-2.0g，F(xiàn)eSO4?0.001-0.005g，蛋白胨5-10g，用蒸餾水定容至3L，pH值5.0-8.0；

將發(fā)酵罐培養(yǎng)基于115℃、15min滅菌再冷卻；然后按照體積比5-12％的接種量將液體培養(yǎng)基接入上述冷卻的發(fā)酵罐培養(yǎng)基中，發(fā)酵溫度28-38℃，溶氧控制在30-40％；

S5.發(fā)酵14-30個(gè)小時(shí)后，將發(fā)酵液排出1-2.5L，并將滅過菌的1-2.5L液體發(fā)酵培養(yǎng)基加入5L小罐中，繼續(xù)在28-38℃條件下培養(yǎng)10-20個(gè)小時(shí)；上述操作重復(fù)1-3次。

S6.發(fā)酵結(jié)束，將發(fā)酵液用水稀釋0-3倍，用旋渦式攪拌槳以300-400轉(zhuǎn)/分鐘速度攪拌，再勻速緩慢加入0.8-1.3倍體積的丙酮，攪拌半小時(shí)，離心將上清液倒掉，固體烘干后粉碎，得到韋蘭膠的產(chǎn)量為20-40g/L。