[發(fā)明專利]一種離體萌發(fā)法測(cè)定石蒜屬植物花粉活力的方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210352311.5
• 申請(qǐng)日: 2012-09-20
• 公開（公告）號(hào): CN102876768A
• 公開（公告）日: 2013-01-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 肖郁綿;夏宜平;常樂;佘琳芳
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 浙江大學(xué)
• 主分類號(hào): C12Q1/06
• 分類號(hào): C12Q1/06
• 代理公司: 杭州天勤知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 33224
• 代理人: 胡紅娟

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及植物花粉活力測(cè)定領(lǐng)域，尤其涉及一種離體萌發(fā)法測(cè)定石蒜屬植物花粉活力的方法。

背景技術(shù)

石蒜屬植物是一類極具觀賞價(jià)值的植物，花朵碩大，色彩鮮艷，因其耐陰性強(qiáng)，在園林綠化中，多被種植于林下、林緣、草地邊緣等。我國的石蒜屬植物資源非常豐富，但絕大多數(shù)還處于野生狀態(tài)，人工種植品種仍然十分單一，因此選育石蒜的新品種，有助于推廣石蒜屬植物在園林綠化中的應(yīng)用。

在植物的常規(guī)育種中，為了進(jìn)行人工輔助授粉或雜交授粉，需要早期采集和貯存花粉，尤其在雜交育種工作中，研究花粉的活力是必不可少的基礎(chǔ)性工作，通常在使用采集和貯存的花粉之前，需要做花粉活力的測(cè)定。測(cè)定花粉活力是傳統(tǒng)雜交育種的基礎(chǔ)和關(guān)鍵環(huán)節(jié)。

目前對(duì)于花粉活力的測(cè)定主要有三類方法，第一類為花粉染色法，第二類方法為田間授粉法，第三類為花粉離體萌發(fā)法。

花粉染色法是通過使用化學(xué)試劑對(duì)花粉進(jìn)行染色，根據(jù)染色后的花粉顏色的深淺判斷花粉的活力狀況，染色法主要有碘-碘化鉀染色法、醋酸洋紅染色法、TTC染色法等。這類方法快速、簡(jiǎn)便，但由于不同植物花粉壁厚度、淀粉含量、有關(guān)酶含量不同，染色法在不同植物應(yīng)用的效果差異也較大。

田間授粉法是通過人工采集花粉并對(duì)花絲授粉，果實(shí)成熟后計(jì)算授粉結(jié)實(shí)率，這是一種直接、可靠的方法，但是費(fèi)時(shí)、費(fèi)力，受季節(jié)、天氣影響較大。

花粉的離體萌發(fā)法是將采集的花粉進(jìn)行體外的萌發(fā)實(shí)驗(yàn)，統(tǒng)計(jì)萌發(fā)率，此種方法快速、簡(jiǎn)單，準(zhǔn)確度也較高，但是由于不同種類植物的花粉體外萌發(fā)的條件會(huì)有區(qū)別，例如培養(yǎng)基，培養(yǎng)時(shí)間、培養(yǎng)溫度等，需要對(duì)植物花粉的離體培養(yǎng)條件有比較好的把握。

石蒜屬植物的花粉形態(tài)為兩側(cè)對(duì)稱，赤道面觀呈舟形或腎形，極面觀為橢圓形或長橢圓形。目前，國內(nèi)外對(duì)于石蒜屬花粉的研究大多集中在石蒜屬系統(tǒng)關(guān)系和種間分類方面，并未發(fā)現(xiàn)有效的鑒定石蒜屬花粉活力的方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供了一種離體萌發(fā)法測(cè)定石蒜屬植物花粉活力的方法，該方法可以快速、有效地測(cè)定石蒜屬植物的花粉活力。

一種離體萌發(fā)法測(cè)定石蒜屬植物花粉活力的方法，包括收集花粉，將所述花粉置于培養(yǎng)液中進(jìn)行離體培養(yǎng)，

所述培養(yǎng)液的配方為：蔗糖30～80g/L，硼酸15～25mg/L；

所述離體培養(yǎng)的溫度為25～35℃，時(shí)間為60～90min，相對(duì)濕度70～90％。

花粉的離體萌發(fā)法是測(cè)定花粉活力的有效方法，結(jié)果可重復(fù)性高，一般包括如下步驟：收集花粉，將花粉置于培養(yǎng)液中進(jìn)行離體培養(yǎng)，顯微鏡下觀察花粉萌發(fā)情況，統(tǒng)計(jì)花粉萌發(fā)率。

花粉的萌發(fā)能力是反映花粉活力的指標(biāo)之一，因花粉只有萌發(fā)并長出花粉管，才能穿過花柱，進(jìn)入子房，完成受精作用?；ǚ鄣拿劝l(fā)能力通常以花粉萌發(fā)率來表示，通過統(tǒng)計(jì)花粉的萌發(fā)率可以測(cè)定花粉的活力。

離體培養(yǎng)的培養(yǎng)液、溫度、時(shí)間是影響測(cè)定準(zhǔn)確率的主要因素，本發(fā)明對(duì)培養(yǎng)溫度、時(shí)間、培養(yǎng)液配方進(jìn)行了優(yōu)化，能夠快速測(cè)定所述花粉的活力。

本發(fā)明所述石蒜屬植物是指忽地笑、換錦花或中國石蒜。

所述收集花粉的方法為：采集即將開裂的花藥，置于干燥的器皿中干燥3～6天，直至花粉完全開裂，然后收集花粉。為了便于收集花粉，可在器皿中放入一層硫酸紙。當(dāng)然，也可以直接在開裂的花藥上采集。

離體培養(yǎng)時(shí)，可將花粉均勻散布在凹形載玻片上，滴加2～3滴培養(yǎng)液，輕輕混勻，靜置培養(yǎng)，過多培養(yǎng)液容易溢出載玻片。

不同植物花粉離體萌發(fā)需要不同的培養(yǎng)液，培養(yǎng)液的各組分影響花粉的萌發(fā)，本發(fā)明的離體培養(yǎng)的培養(yǎng)液由蔗糖、硼酸和水組成。

蔗糖不僅是花粉萌發(fā)和花粉管伸長主要營養(yǎng)物質(zhì)來源，還維持著外界環(huán)境的滲透壓，蔗糖濃度過低，會(huì)導(dǎo)致外界蔗糖濃度低于花粉內(nèi)部的滲透壓，花粉壁破裂，內(nèi)容物析出，花粉失去生活力，而蔗糖濃度過高時(shí)，又會(huì)造成花粉的質(zhì)壁分離從而抑制萌發(fā)，本發(fā)明蔗糖濃度優(yōu)選為40～60g/L。

硼酸能夠增加花粉對(duì)蔗糖的吸收、運(yùn)轉(zhuǎn)和代謝，形成糖硼酸復(fù)合體，增加氧的吸收，并促進(jìn)構(gòu)成花粉管的成分-果膠物的合成，從而促進(jìn)花粉萌發(fā)和花粉管生長，所述硼酸的濃度優(yōu)選為20～25mg/L。

花粉的萌發(fā)是花粉細(xì)胞內(nèi)一系列生理生化反應(yīng)的結(jié)果，而生理生化反應(yīng)的有序進(jìn)行必然需要適宜的溫度，離體培養(yǎng)一定時(shí)間后，花粉的萌發(fā)率和花粉管生長處于穩(wěn)定狀態(tài)，優(yōu)選的，所述離體培養(yǎng)的溫度為27～30℃。

此外，在花粉的離體培養(yǎng)過程中，為了防止所述培養(yǎng)液的蒸發(fā)，離體培養(yǎng)時(shí)，保持環(huán)境的相對(duì)濕度為70％～90％。