[發明專利]miRNA 320a在前列腺癌血清學診斷試劑盒中的應用

無效

• 申請號: 201210351683.6
• 申請日: 2012-09-19
• 公開（公告）號: CN102827943A
• 公開（公告）日: 2012-12-19
• 發明（設計）人: 石建黨;張琚;王玉琢;成颯;楊闊;杜小玲;原輝;徐勇;羅飛
• 申請（專利權）人: 南開大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 天津佳盟知識產權代理有限公司 12002
• 代理人: 侯力

技術領域

本發明涉及一種微小RNA（micro?RA，miRNA，miR）320a在前列腺癌血清學診斷試劑盒中的應用。屬于生物醫學材料技術領域。?

背景技術

前列腺癌（prostate?carcinoma,PCa）為歐美國家男性常見惡性腫瘤和主要死亡原因之?

隨著我國人均壽命延長和生活方式的西化，PCa發病率呈逐年增加趨勢，它被列為中國21世紀增長最快的腫瘤之一。本項目在前期工作中篩選出的19個在前列腺癌組織中表達上調的miRNAs序列的基礎上，進一步檢測其在臨床血清樣本中的含量，尋找人前列腺癌轉移患者的血清學生物標志物。?

目前前列腺癌診斷指標的研究工作主要集中在以下幾個方面：(I)?PSA亞型和其它的激肽釋放酶(如血清KLK2)；(II)DNA生物標志物,包括一些表觀遺傳學生物標志物(如GSTPi甲基化),基因融合(如TMPRSS2:ERG融合)和雜合性缺失等;(III)RA生物標志物,如非編碼的前列腺特異的RA?PCA3（曾被稱為DD3）和α-甲基酰基輔酶A消旋酶（Alpha-methylacyl?CoA?racemase，AMACR)mRA在前列腺癌中的表達；(IV)蛋白分子標志物，如PSA，前列腺特異膜抗原(prostate-specifc?membrane?antigen，PSMA),前列腺干細胞抗原(prostatestem?cell?antigen，PSCA)等。盡管許多候選的生物學標志物在不斷地被發現,尚無新的指標和方法應用于臨床檢測。?

miRAs是一種新的不編碼蛋白的內源性小RAs，它們通過抑制蛋白質翻譯過程在細胞增殖、凋亡以及分化等生物學功能方面發揮著重要的調控作用。通過miRAs微列陣、Northern?blot和實時PCR等手段，在多種類型人腫瘤中已經發現了一些miRAs表達上調和下調的現象。有研究報道了miRA在乳腺癌和肝癌轉移中發揮了重要的作用。近年研究發現，人血漿和血清中存在其它組織來源的miRNAs，它們可以以一種可抵抗內源性RA酶活性的形式存在。測定血漿或血清中腫瘤來源miRNAs的含量可以作為腫瘤檢測的手段之一。近年有研究者報道從血清和其它一些體液中miRA的水平可以診斷一些處于早期的疾病。2008年Mitchell報道，miR-141在前列腺癌組患者血清中比對照組高46倍，而且其靈敏度為60%，特異性為100%。對于血清中miRAs的深入研究可為尋找疾病生物標志物提供新的獨特視角。?

有研究報道，miR-320a在肝癌、胰腺癌、膀胱癌、膠質母細胞瘤、甲狀腺乳頭狀癌、黑色素瘤等大部分人腫瘤中頻繁高表達。它通過靶向作用于抑癌基因如p27、p57，PTEN，前凋亡因子Bim、Bmf等，抑制細胞凋亡、促進細胞生長和遷移，參與腫瘤的發生發展過程。目前的研究結果提示miRA-320a可能是一種致癌miRNA，在人類多種腫瘤的發生?和發展階段扮演著至關重要的角色。?

發明內容

本發明的目的是提供檢測血液中miR-320a的試劑在制備用于前列腺癌血清學診斷的試劑盒中的應用。?

本發明利用我們發明的異種移植模型和新一代測序技術，對轉移和非轉移前列腺癌異種移植組織系中miRNAs的轉錄組學進行了深入的研究，初步發現miR－320a與前列腺癌的惡性程度相關(Watahiki?et?al.,PLOS?One?2011)。?

我們優化了從血清中提取miRNA的方法以及用實時定量PCR檢測miRNA的方法；整理和收集了百余份前列腺癌患者的病理資料和血清樣本；對用異種移植模型篩選出的在轉移前列腺癌組織中上調的19個miRNA序列進行了臨床血清樣本的檢測，揭示了miR－320a在前列腺癌患者血清中和組織中含量明顯升高。該發明對開發中國人群前列腺癌的血清學臨床診斷方案中具有重要的應用前景。?

本發明首先提供了一種檢測血液樣品中微小RNAmiR-320a及其前體的試劑在制備用于對對象前列腺癌診斷和治療方案選擇的試劑盒中的應用，所述試劑是對微小RNAmiR-320a及其前體具有特異性的試劑，具體是：對miR-320a及其前體有檢測特異性的PCR引物和雜交探針以及利用該探針制備的基因芯片。?

所述miR-320a的序列如SEQ?ID?NO：1所示；?

在一個優選例中，所述特異性引物選自SEQ?ID?NO:2所示序列；?

在一個優選例中，所述特異性探針選自SEQ?ID?NO:5所示序列。?

本發明通過檢測血液中miR-320a的含量來診斷對象是否患有前列腺癌。?