[發明專利]浙貝母PCR鑒定試劑盒及鑒定方法

有效

• 申請號: 201210350761.0
• 申請日: 2012-09-20
• 公開（公告）號: CN102899409A
• 公開（公告）日: 2013-01-30
• 發明（設計）人: 李敏;趙欣;黃龍妹;陳劍
• 申請（專利權）人: 浙江工業大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/12
• 代理公司: 杭州天正專利事務所有限公司 33201
• 代理人: 黃美娟;王兵

（一）技術領域

本發明涉及一種中藥材浙貝母的DNA分子鑒定方法，特別涉及中藥浙貝母PCR鑒定試劑盒、特異性引物、模板及鑒定方法。

（二）背景技術

浙貝母是一種常用中藥，具有止咳化痰的療效，是道地藥材“浙八味”之一。除了浙貝母外，藥典記載的貝母品種包括川貝、湖北貝母、平貝母和伊貝母，另外流通領域還存在浙貝母的偽品草貝母和土貝母。貝母因為品種的不同，藥效差別較大，偽品具有毒性，而且各品種之間價格差異非常大，對浙貝母進行鑒定具有重要意義。浙貝母與其他品種外觀非常相似，利用常規的中藥鑒定方法很難將它們進行區分鑒別。當藥材加工成粉末后就更加難以鑒定。利用DNA分子鑒定方法能夠解決浙貝母鑒別困難的問題，因為這種方法能夠從基因水平上進行品種的甄別，具有準確、高效、重復性好，不受樣品產地、生長環境和來源的影響。

本發明提供的PCR檢測法就是一種浙貝母的DNA分子鑒定方法，能夠準確鑒定浙貝母。目前此種方法在浙貝母鑒定中的應用在專利號03113004.6公開說明書中有所描述，但是使用的引物序列是利用GeneBank數據庫下載的貝母植物RNA分子的序列隨機設計的。本發明提供的引物是根據浙貝母基因組中的特異性DNA分子標記的序列設計的，所獲引物的獲取途徑和序列與專利號03113004.6公開說明書中所述完全不同。由于本發明提供的引物序列是建立于浙貝母區別于其他品種的特異性DNA分子標記的篩選、克隆和測序工作上的成果，因此，應用該引物的PCR檢測法準確性和靈敏度更高，能用于檢測混合DNA樣品。并且，本發明提供的PCR檢測法在檢測步驟和檢測結果判斷依據上也與專利號03113004.6公開說明書中的所述內容不同。

（三）發明內容

本發明目的是提供一種能夠準確鑒定中藥浙貝母的PCR鑒定試劑盒及檢測法，包括PCR檢測法關鍵試劑PCR引物、模板和PCR檢測法的檢測步驟。

本發明采用的技術方案是：

本發明提供一種浙貝母PCR鑒定試劑盒，所述試劑盒中的特異性引物為ZB1和ZB2：

ZB1：5'-ACAGTACTGGGGGAGAAGTC-3'，

ZB2：5'-CAAATGGAGGGTATGTGTCG-3'。

進一步，所述浙貝母PCR鑒定試劑盒的組成為：

本發明還涉及一種適于本發明浙貝母PCR鑒定試劑盒的浙貝母基因，所述浙貝母基因的核苷酸序列為SEQ?ID?NO.1所示。

SEQ?ID?NO.1序列：

5’-CGGACAGTACTGGGGGAGAAGTCAAATACTGTTTTATCTGCCTGAAGGCTGCTTCGCACTCTTCCGTCCATTCAAACTCTCTGCTTCCTCATAGCATCGCTGTAAAAGTTTTTATCTTGTCCGATGATCTTGATATGAAGCGGTAAAGGGCTGCTATTCTTCCACTCAGTACCTGTATGTCTTTCACTGTTTTGGGGCTTTCCATCCCCAGTATCGATTTTGTTTGCGCTGGATCTGCGCTGATTCTCTTCTTGTGCACTATGTGCCCTAAGAACTTACCTAAAGCTACTCCAAATATGCATTTTTTTGGATTCAATTTCAGGGAGAAGATGCGTAATCGGTCGAAGGCCTCCTCTAGGTTCTGGATATGATCCTCCTTTTTAGAACTTTTTACCAGTAAATCATCAATTTATGTGCCTACTGTTTTCCCTAGTAGCCCTTGAAAGATTCTGGTAATCAACCGTTGAAAAGTTGCTCCTGCATTCTTAAGTCCAAAGGGCATCACCGTGTAGCAATATAACCCTAAGGGAGTAGTGAAACTGGTGTGTTCCTCATCTTGCAGATTTAACTTGATTTGATTATAGCCTGAACAGGCATCCAAAAAAGATATCCTCTCGTGACCCACCAGTGAGTCCACCAACTGGCATATCCGTGGTAGCGGGAAACTGTCCTTGGGACAGGCTTTATTTAGATCTGTGTAGTCGACACATACCCTCCATTTGCCG-3’

框內序列為RAPD引物序列。