[發明專利]重組柯薩奇病毒B3型病毒樣顆粒的制備方法及其應用

無效

• 申請號: 201210350637.4
• 申請日: 2012-09-19
• 公開（公告）號: CN102827846A
• 公開（公告）日: 2012-12-19
• 發明（設計）人: 盛望;張瀟;王曉雯;趙淼;曾毅;李澤琳;劉偉
• 申請（專利權）人: 北京工業大學
• 主分類號: C12N15/41
• 分類號: C12N15/41;C12N15/81;C12N7/04;C12N5/10;C12N1/15;C12N1/19;C12N1/21;A61K39/125;A61P31/14
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;任鳳華

1.柯薩奇病毒B3型病毒樣顆粒的制備方法，包括如下步驟：

1）將柯薩奇病毒B3型的P1基因和3CD基因克隆到目的質粒中，得到重組表達載體；

2）用步驟1）得到的重組表達載體轉化目的酵母細胞，得到表達所述P1基因和所述3CD基因的重組酵母細胞；

3）裂解步驟2）得到的重組酵母細胞，分離得到重組的柯薩奇病毒B3型病毒樣顆粒。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述P1基因和所述3CD基因均為經過密碼子優化的基因；所述優化為在不改變野生型柯薩奇病毒B3型P1蛋白和野生型柯薩奇病毒B3型3CD蛋白氨基酸序列的前提下，將野生型柯薩奇病毒B3型P1基因和野生型柯薩奇病毒B3型3CD基因的密碼子替換為酵母細胞偏好的密碼子。

3.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述P1基因的核苷酸序列為序列表中序列1所示；所述3CD基因的核苷酸序列為序列表中序列2所示。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述目的酵母細胞為釀酒酵母、多形漢遜酵母、巴斯德畢赤酵母、胞壁克魯維氏酵母、乳克魯維氏酵母或粟酒裂殖糖酵母。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述P1基因和所述3CD基因在所述重組表達載體中各由一個啟動子驅動轉錄，驅動所述P1基因的啟動子方向和驅動所述3CD基因的啟動子方向相反。

6.根據權利要求1-5中任一所述的方法，其特征在于：所述重組表達載體為將所述P1基因和所述3CD基因分別插入到pESC-URA的兩個多克隆位點處各由一個啟動子驅動轉錄得到的重組質粒。

7.利用權利要求1-6中任一所述方法制備得到的柯薩奇病毒B3型病毒樣顆粒。

8.密碼子優化型的柯薩奇病毒B3型的P1基因，其特征在于：所述P1基因的核苷酸序列為序列表中序列1所示；或

密碼子優化型的柯薩奇病毒B3型的3CD基因，其特征在于：所述3CD基因的核苷酸序列為序列表中序列2所示。

9.含有權利要求8所述P1基因和/或3CD基因的重組表達載體、表達盒、轉基因細胞系或重組菌。

10.權利要求8所述P1基因和/或3CD基因在制備下述a）或b）產品中的應用：

a）柯薩奇病毒B3型病毒樣顆粒；

b）以柯薩奇病毒B3型病毒樣顆粒為活性成分的預防性疫苗。