[發明專利]一種無動物源的臍血干細胞無血清培養基

有效

• 申請號: 201210350601.6
• 申請日: 2012-09-19
• 公開（公告）號: CN102827810A
• 公開（公告）日: 2012-12-19
• 發明（設計）人: 武曉云;康會彥;呂巖;劉學敏;王云虹;王黎明;高錦
• 申請（專利權）人: 北京京蒙高科干細胞技術有限公司
• 主分類號: C12N5/0789
• 分類號: C12N5/0789
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 馮瓊

技術領域

本發明涉及生物領域，特別涉及一種化學成分明確、無動物源的臍血干細胞無血清培養基。

背景技術

臍血作為一種可替代干細胞來源，含有豐富的造血干細胞、間充質干細胞和內皮祖細胞。臍血干細胞是近年發現的一類具有與骨髓干細胞、外周血干細胞相同的多向分化潛能的原始祖細胞。臍血干細胞具備自我更新和增殖的能力，并能在特定因素的影響或誘導下，向各種細胞或組織分化。作為骨髓及外周血干細胞的替代物，臍血干細胞可重建骨髓造血及免疫，用于治療骨髓衰竭、惡性及非惡性血液病、某些遺傳病、重型免疫缺陷等疾病。

與骨髓和外周血相比，臍血作為移植來源具有很多優勢，首先，臍血中原始干/祖細胞的比例高于骨髓和動員的外周血；其次減少了移植中病毒性疾病的傳播，并且降低了移植物抗宿主病（GVHD）的發生率；另外，臍血來源廣泛，采集方便，所以近年來有關臍血干細胞移植的研究越來越廣泛。但是由于單份臍血量少，一般為60～80mL左右，只能滿足較小兒童移植的需要，因此人們希望通過體外培養來增加臍血干/祖細胞的數量以滿足較大兒童和成人移植的需要。

目前國內外對于臍血干細胞的擴增體系主要是基礎培養基添加一定濃度的胎牛血清（FBS）。盡管歐洲等允許使用FBS，但中國、美國等國家嚴禁在細胞治療中使用動物源成分。FBS中含有異種蛋白質，它本身有攜帶細菌、病毒、蛋白傳染性疾病或朊病毒的風險。另外，有研究表明干細胞在培養過程中可以吞噬培養基中的蛋白，內含有牛血清蛋白(7mg-30mg/10⁸cells)，可以使受者體內產生抗牛蛋白抗體引起免疫反應，從而導致患者尤其在重復輸注干細胞治療后治療失效。因此FBS在干細胞臨床大規模培養中的不利因素已經逐漸暴露出來，現已有很多學者研究FBS的替代品。當前已有一些公司開發新一代無血清培養基．如Invitrogen開發無血清培養基、Lonza開發的X-VIVO無血清培養基和加拿大stemcell公司開發了無血清培養基等。

這些無血清培養基化學成分不確定，且價格昂貴，難以保證培養基批次間的一致性。

發明內容

為了解決上述技術問題，本發明提供一種無血清培養基，其必要組成為IMDM?17.7g/L、L-谷氨酰胺1-5mM、碳酸氫鈉3.024g/L、重組人胰島素1-10mg/L、人轉鐵蛋白5-20mg/L、重組人白蛋白4-10g/L、2-巰基乙醇55nM、植物血凝素PHA?1-5ug/ml、脂質0.1-1mg/ml、氨基酸1-10g/l、維生素1-10mg/ml、微量元素1-5mg/ml、IL-31-10ng/ml、SCF?100ng/ml、Fit3-L?100ng/ml、IL-610-20ng/ml、G-CSF?1-10ng/ml。

更優選地，本發明所述無血清培養基其必要組成為IMDM?17.7g/L、L-谷氨酰胺5mM、碳酸氫鈉3.024g/L、丙酮酸鈉110mg/L、重組人胰島素10mg/L、人轉鐵蛋白10mg/L、重組人白蛋白4g/L、2-巰基乙醇55nM、植物血凝素PHA?2ug/ml、脂質0.5mg/ml、氨基酸5g/l、維生素8mg/ml、微量元素2mg/ml、IL-37ng/ml、SCF?100ng/ml、Fit3-L100ng/ml、IL-620ng/ml、G-CSF?10ng/ml。

作為優選，本發明所述無血清培養基還包含丙酮酸鈉110mg/L、大豆卵磷脂10-20mg/L、F-68100-500mg/L、TPO?1-10ng/ml、GM-CSF?1-10ng/ml、IL-111-10ng/ml。

更優選地，本發明所述無血清培養基包含丙酮酸鈉110mg/L、大豆卵磷脂15mg/L、F-68100mg/L、TPO?2ng/ml、GM-CSF10ng/ml、IL-111ng/ml。

用本發明提供無動物源的無血清培養基與有血清培養基以及X-VIVO無血清培養基培養臍血干細胞，結果顯示，其細胞總數、細胞表型和分泌細胞因子沒有統計學差異，而且避免了動物成分和批次的不穩定性。

本發明還提供所述無血清培養基在培養臍血干細胞中的應用。