[發(fā)明專利]柯薩奇病毒B3型病毒樣顆粒的制備方法及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210349983.0
• 申請日: 2012-09-19
• 公開（公告）號: CN102899336A
• 公開（公告）日: 2013-01-30
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 盛望;張瀟;趙淼;王曉雯;曾毅;李澤琳;劉偉
• 申請（專利權(quán)）人: 北京工業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C12N15/41
• 分類號: C12N15/41;C12N15/81;C12N7/04;C12N5/10;C12N1/15;C12N1/19;C12N1/21;A61K39/125;A61P31/14
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 關(guān)暢;任鳳華

1.柯薩奇病毒B3型病毒樣顆粒的制備方法，包括如下步驟：

1）將柯薩奇病毒B3型的VP1基因和VP4基因克隆到目的質(zhì)粒1中，得到重組表達(dá)載體1，將VP2基因和VP3基因克隆到目的質(zhì)粒2中，得到重組表達(dá)載體2；

2）用步驟1）得到的重組表達(dá)載體1和重組表達(dá)載體2共轉(zhuǎn)化目的酵母細(xì)胞，得到表達(dá)所述VP1基因、所述VP2基因、所述VP3基因和所述VP4基因的重組酵母細(xì)胞；

3）裂解步驟2）得到的重組酵母細(xì)胞，分離得到柯薩奇病毒B3型病毒樣顆粒。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：所述VP1基因、所述VP2基因、所述VP3基因和所述VP4基因均為經(jīng)過密碼子優(yōu)化的基因；所述優(yōu)化為在不改變野生型柯薩奇病毒B3型VP1蛋白、野生型柯薩奇病毒B3型VP2蛋白、野生型柯薩奇病毒B3型VP3蛋白和野生型柯薩奇病毒B3型VP4蛋白氨基酸序列的前提下，將野生型柯薩奇病毒B3型VP1基因、野生型柯薩奇病毒B3型VP2基因、野生型柯薩奇病毒B3型VP3基因和野生型柯薩奇病毒B3型VP4基因的密碼子均替換為酵母細(xì)胞偏好的密碼子。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述VP1基因、所述VP2基因、所述VP3基因和所述VP4基因的核苷酸序列分別為序列表中序列2、序列3、序列4和序列5所示。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：所述目的酵母細(xì)胞為釀酒酵母、多形漢遜酵母、巴斯德畢赤酵母、胞壁克魯維氏酵母、乳克魯維氏酵母或粟酒裂殖糖酵母。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：所述VP1基因和所述VP4基因在所述重組表達(dá)載體1中各由一個啟動子驅(qū)動轉(zhuǎn)錄，驅(qū)動所述VP1基因的啟動子方向和驅(qū)動所述VP4基因的啟動子方向相反；所述VP2基因和所述VP3基因在所述重組表達(dá)載體2中各由一個啟動子驅(qū)動轉(zhuǎn)錄，驅(qū)動所述VP2基因的啟動子方向和驅(qū)動所述VP3基因的啟動子方向相反。

6.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任一所述的方法，其特征在于：所述重組表達(dá)載體1為將所述VP1基因和所述VP4基因分別插入到pESC-URA的兩個多克隆位點(diǎn)處，得到的所述VP1基因和所述VP4基因各由一個啟動子驅(qū)動轉(zhuǎn)錄的重組質(zhì)粒；所述重組表達(dá)載體2為將所述VP2基因和所述VP3基因分別插入到pESC-HIS的兩個多克隆位點(diǎn)處，得到的所述VP2基因和所述VP3基因各由一個啟動子驅(qū)動轉(zhuǎn)錄的重組質(zhì)粒。

7.利用權(quán)利要求1-6中任一所述方法制備得到的柯薩奇病毒B3型病毒樣顆粒。

8.密碼子優(yōu)化型的柯薩奇病毒B3型的VP1基因，其特征在于：所述VP1基因的核苷酸序列為序列表中序列2所示；或

密碼子優(yōu)化型的柯薩奇病毒B3型的VP2基因，其特征在于：所述VP2基因的核苷酸序列為序列表中序列3所示；或

密碼子優(yōu)化型的柯薩奇病毒B3型的VP3基因，其特征在于：所述VP3基因的核苷酸序列為序列表中序列4所示；或

密碼子優(yōu)化型的柯薩奇病毒B3型的VP4基因，其特征在于：所述VP4基因的核苷酸序列為序列表中序列5所示。

9.含有權(quán)利要求8所述VP1基因、所述VP2基因、所述VP3基因和所述VP4基因中至少一種的重組表達(dá)載體、表達(dá)盒、轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系或重組菌。

10.權(quán)利要求8所述VP1基因、所述VP2基因、所述VP3基因和所述VP4基因中至少一種在制備下述a）或b）產(chǎn)品中的應(yīng)用：

a）柯薩奇病毒B3型病毒樣顆粒；

b）以柯薩奇病毒B3型病毒樣顆粒為活性成分的預(yù)防性疫苗。