[發(fā)明專利]挖掘真核生物基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控組差異蛋白的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210348284.4
• 申請日: 2012-09-18
• 公開（公告）號: CN102887938A
• 公開（公告）日: 2013-01-23
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 孟慶勇;王萌;高婧;李寧
• 申請（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C07K1/00
• 分類號: C07K1/00;C07K1/26
• 代理公司: 北京路浩知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11002
• 代理人: 王朋飛;張慶敏

1.挖掘真核生物基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控組差異蛋白的方法，其特征在于，包括以下步驟：

1）將5’或3’端帶有生物素的啟動子序列或其片段與表面吸附有鏈親和素的磁珠結(jié)合，形成磁珠-啟動子二元復(fù)合物；

2）分別從處于不同生長、發(fā)育或分化階段的細(xì)胞或組織中提取核蛋白，然后分別將這些特定時期的核蛋白與磁珠-啟動子二元復(fù)合物結(jié)合，從而形成磁珠-啟動子-核蛋白三元復(fù)合物；

3）對步驟2）中得到的三元復(fù)合物進(jìn)行聚丙烯酰胺凝膠電泳分析，找出差異條帶，以確定所要候選目的蛋白的片段長度，然后進(jìn)行二維電泳分離提純目的蛋白，并對分離純化的目的蛋白進(jìn)行質(zhì)譜分析或氨基酸測序，從而確定所含蛋白。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟2）為：分別從處于不同生長、發(fā)育或分化階段的細(xì)胞或組織中提取核蛋白，并分別將這些特定時期的核蛋白與能夠封閉所述啟動子序列或其片段上非特異性蛋白結(jié)合位點(diǎn)的蛋白混合，然后分別將這些混合好的蛋白與磁珠-啟動子二元復(fù)合物結(jié)合，從而形成磁珠-啟動子-核蛋白三元復(fù)合物。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，能夠封閉所述啟動子序列或其片段上非特異性蛋白結(jié)合位點(diǎn)的蛋白為BSA蛋白或脫脂奶粉。