[發(fā)明專利]一種尼泊司他汀生產(chǎn)工藝

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210347711.7
• 申請日: 2012-09-05
• 公開（公告）號: CN102827892A
• 公開（公告）日: 2012-12-19
• 發(fā)明（設計）人: 李海霞;朱善超
• 申請（專利權）人: 李海霞
• 主分類號: C12P17/02
• 分類號: C12P17/02;C12R1/465
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發(fā)明涉及一種尼泊司他汀生產(chǎn)工藝。

背景技術

尼泊司他汀，英文名稱：Lipstatin，白色油狀物，是一種用于生產(chǎn)新型減肥藥奧利司他的醫(yī)藥中間體。奧利司他是由發(fā)酵物尼泊司他汀經(jīng)一步加氫還原制得。奧利司他目前是全球唯一的減肥類藥品，是長效和強效的特異性胃腸道脂肪酶抑制劑，它通過與胃和小腸腔內(nèi)胃脂肪酶和胰脂肪酶的活性絲氨酸部位形成共價鍵使酶失活而發(fā)揮治療作用，失活的酶不能將食物中的脂肪，主要是甘油三酯水解為可吸收的游離脂肪酸和單?；视?。未消化的甘油三酯不能被身體吸收，從而減少熱量攝入，控制體重。

毒三素鏈霉菌，拉丁學名：Streptomycestoxytricini，為鏈霉菌科、鏈霉菌屬，孢子絲長，頂端2-3圈緊密大螺旋形。孢子橢圓形至柱形，表面光滑。抑制金黃色葡萄球菌、枯草桿菌、大腸桿菌、白色假絲酵母、顆粒青霉。

現(xiàn)有技術中，發(fā)酵生產(chǎn)尼泊司他汀的工藝存在的生產(chǎn)成本高、發(fā)酵效價低的缺點。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術的缺陷，提供一種生產(chǎn)成本低、發(fā)酵效價高的尼泊司他汀生產(chǎn)工藝。

為解決上述問題，本發(fā)明所采用的技術方案是：

一種尼泊司他汀生產(chǎn)工藝，其特征在于：包括如下流程：

A、用發(fā)酵液培養(yǎng)基和去離子水配制發(fā)酵液

所述發(fā)酵液培養(yǎng)基采用以下原料制成：甘油、黃豆粉、卵磷脂、葵花油、硫酸鎂和碳酸鈣；配制成的發(fā)酵液中，上述各原料的百分比含量分別為：甘油1％-4.5％、黃豆粉2％-6.5％、卵磷脂1.5％-4％、葵花油5％-12％、硫酸鎂0.01％-0.15％、碳酸鈣0.05％-0.4％；

B、發(fā)酵

B1、在發(fā)酵液中接種毒三素鏈霉菌菌種，菌種的接種量為發(fā)酵液的2％-10％，菌種的細菌濃度為15％-25％；

B2、菌種發(fā)酵過程中，發(fā)酵液的溫度控制在26℃-29℃，發(fā)酵時間為6-8天；

B3、菌種發(fā)酵過程中，采用酸堿自動平衡來調(diào)節(jié)發(fā)酵液的pH值，使pH值維持在6.8～7.8之間；

B4、菌種發(fā)酵過程中，通過通氣量和攪拌速度自動調(diào)節(jié)發(fā)酵液的溶氧水平，使溶氧水平維持在35％以上，所述攪拌速度為60-160rpm；

C、發(fā)酵產(chǎn)物純化，包括如下步驟：

C1、發(fā)酵結束后，酸化處理發(fā)酵液，使發(fā)酵液的pH值調(diào)節(jié)為1-6，并采用噴霧干燥的方法獲得干菌絲體；

C2、將干菌絲體加入1-14倍體積的丙酮溶液中，浸泡4～12小時，半框過濾除去菌絲，收集濾液；

C3、在濾液補加純水，制得丙酮濃度為35％～55％的丙酮稀釋液；

C4、向丙酮稀釋液中加入正庚烷，并進行萃取，萃取后收集正庚烷相；

C5、對正庚烷相進行減壓濃縮，至無餾分析出，制得正庚烷濃縮液；

C6、向正庚烷濃縮液中加入乙腈，冷卻后，分層除油；

C7、收集乙腈相，并對其減壓濃縮，至無餾分析出，制得乙腈濃縮液；

C8、用己烷稀釋乙腈濃縮液，然后，上硅膠柱進行吸附；

C9、吸附完畢后，用己烷洗脫，收集洗脫液；

C10、對洗脫液進行減壓濃縮，至無餾分析出；

C11、二次結晶，收集晶體，減壓濃縮，制得高純度尼泊司他汀。

進一步地說：

所述尼泊司他汀發(fā)酵液培養(yǎng)基中還包含有適量的微量元素。

所述B3步驟中，采用氫氧化鈉和鹽酸對發(fā)酵液的pH值進行自動平衡調(diào)節(jié)。

所述C1步驟中，采用25％-45％的硫酸對發(fā)酵液進行酸處理。

所述發(fā)酵產(chǎn)物純化流程中所使用的正庚烷、己烷、丙酮、乙腈均為工業(yè)級，含量均大于95％。

所述C8步驟中，所述硅膠柱采用的硅膠為80-120目。

與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明以黃豆粉、葵花油、甘油等作為發(fā)酵培養(yǎng)基的主要氮源和碳源，并通過調(diào)控發(fā)酵工藝及培養(yǎng)基組份，采用毒三素鏈霉菌經(jīng)過發(fā)酵、純化、精制而獲得高純度尼泊司他汀，使尼泊司他汀的生產(chǎn)成本大大降低，發(fā)酵效價提高，解決了現(xiàn)有技術中存在的生產(chǎn)成本高、發(fā)酵效價低的缺點。

下面結合說明書附圖和具體實施方式對本發(fā)明做進一步的描述。說明書附圖

圖1是本發(fā)明的實施例1所述生產(chǎn)工藝的產(chǎn)物尼泊司他汀含量HPLC圖；

圖2是本發(fā)明的實施例2所述生產(chǎn)工藝的產(chǎn)物尼泊司他汀含量HPLC圖；

圖3是本發(fā)明的實施例3所述生產(chǎn)工藝的產(chǎn)物尼泊司他汀含量HPLC圖。

具體實施方式