[發明專利]一種檢測微痕量克百威的方法

有效

• 申請號: 201210346004.6
• 申請日: 2012-09-18
• 公開（公告）號: CN102841067A
• 公開（公告）日: 2012-12-26
• 發明（設計）人: 侯長軍;沈才洪;何昆;張良;霍丹群;張宿義;彭云;江勇
• 申請（專利權）人: 瀘州品創科技有限公司;重慶大學
• 主分類號: G01N21/33
• 分類號: G01N21/33;G01N1/34
• 代理公司: 重慶博凱知識產權代理有限公司 50212
• 代理人: 張先蕓;梁展湖

技術領域

本發明涉及化學農藥的檢測技術領域，尤其涉及氨基甲酸酯類農藥中克百威檢測方法，具體涉及一種檢測微痕量克百威的方法。

?

背景技術

克百威屬于氨基甲酸酯類農藥，氨基甲酸酯類農藥是常用的三大農藥之一。該類農藥常用來處理農作物的種子，可以有效的抑制多種害蟲。

克百威屬高毒殺蟲劑，對眼睛和皮膚無刺激作用。在試驗劑量內對動物無致畸、致突變、致癌作用，對魚、鳥高毒，對蜜蜂無毒害。?但是由于克百威的高毒性和難降解等性質，其適當的用量和正確的使用方式直接影響其對作用的發揮及對人和環境的影響，在蔬菜、水果等直接食用的農作物上，國內外一般的做法都是對其使用量做了嚴格的限制；在其他農作物上比如水稻、棉花、煙草、大豆等作物上也限制了其用量。這主要是由于，克百威高毒性和難降解等性質，一旦用量超標就會導致農產品和土壤中產生大量的農藥殘留，從而對人體和生態環境帶來不利的影響。因此，對克百威殘留量簡單、快速和靈敏的檢測非常重要。

近年來對農藥殘留檢測用的較多的是色譜法，包括氣相色譜(GC)、氣相色譜～質譜聯用(GC～MS)，高效液相色譜(HPLC)等。這些方法靈敏度高，準確性好。但是由于這類檢測手段需要大型的設備、專業的操作人員以及需要消耗大量的試劑，這使色譜法檢測的成本非常高，從而限制了色譜法的廣泛應用。

?

發明內容

針對現有技術存在的上述問題，本發明要解決的技術問題是：如何提供一種對植物中克百威殘留量成本低廉，操作簡單，且檢測準確性高的檢測方法。

解決該技術問題，本發明是這樣實現的：一種檢測微痕量克百威的方法，具體步驟如下：

一種檢測微痕量克百威的方法，其特征在于：具體步驟如下,

步驟1：將面粉和蒸餾水以1:5的重量比進行混合得到面糊，對該面糊進行攪拌使面粉與水均勻混合，然后將所述面糊在4000r/min的離心速度之下離心10min，收集上清液，即得粗酶；

步驟2：取1mL步驟1中的粗酶，將該粗酶加入到27%PEG1000/13%NaH₂PO₄體系中，攪拌混合均勻，靜置分相后，取出PEG相，將取出的PEG相加入到27%PEG1000/13%NaH₂PO₄/6%(NH₄)₂SO_4?????體系中，攪拌混合均勻，靜置分相后，對由磷酸二氫鈉與硫酸銨組成的無機鹽相進行透析、濃縮和冷凍干燥，得到純化后的植物酯酶粉末，然后再將該植物酯酶粉末用蒸餾水溶解得到植物酯酶酶液；

步驟3：配制濃度為70～165μmol/L四苯基鋅卟啉溶液，其中四苯基鋅卟啉的粉末為溶質，?N,N-二甲基甲酰胺為溶劑；

步驟4：將步驟2制備的植物酯酶酶液、步驟3制備的四苯基鋅卟啉溶液及pH值為6.5～7.25的磷酸鹽緩沖液均勻混合得到四苯基鋅卟啉～植物酯酶復合溶液，其中植物酯酶酶液，四苯基鋅卟啉溶液和pH值為6.5～7.25的磷酸鹽緩沖液的體積比為1：0.5～2：48.5～47；

步驟5：使用紫外分光光度計檢測步驟4中制得的四苯基鋅卟啉～植物酯酶復合溶液對波長300nm～750nm的光波的吸收光譜曲線；

步驟6：將步驟2制備的植物酯酶酶液、步驟3制備的四苯基鋅卟啉溶液和pH值為6.5～7.25的磷酸鹽緩沖液均勻混合，再加入待測樣品的N,N～二甲基甲酰胺清洗液，攪拌均勻混合后得到樣品混合溶液，其中植物酯酶酶液，四苯基鋅卟啉溶液，pH值為6.5～7.25的磷酸鹽緩沖溶液和待測樣品的N,N～二甲基甲酰胺清洗液的體積比為1：0.5～2：42～43.5：5；

步驟7：使用紫外分光光度計檢測步驟6中制得樣品混合溶液對波長300nm～750nm的光波的吸收光譜曲線；

步驟8：對步驟5測得的吸收光譜曲線與步驟7測得的吸收光譜曲線進行比較，如果兩個光譜曲線完全相同，則待測樣品的N,N～二甲基甲酰胺清洗液中不含有克百威或克百威的含量超出了本方法的檢測限；如果兩個光譜曲線不同，則待檢測樣品中含有克百威。