[發(fā)明專利]一種檢測微痕量克百威的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210346004.6
• 申請日: 2012-09-18
• 公開（公告）號: CN102841067A
• 公開（公告）日: 2012-12-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 侯長軍;沈才洪;何昆;張良;霍丹群;張宿義;彭云;江勇
• 申請（專利權(quán)）人: 瀘州品創(chuàng)科技有限公司;重慶大學(xué)
• 主分類號: G01N21/33
• 分類號: G01N21/33;G01N1/34
• 代理公司: 重慶博凱知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 50212
• 代理人: 張先蕓;梁展湖

1.一種檢測微痕量克百威的方法，其特征在于：具體步驟如下,

步驟1：將面粉和蒸餾水以1:5的重量比進(jìn)行混合得到面糊，對該面糊進(jìn)行攪拌使面粉與水均勻混合，然后將所述面糊在4000r/min的離心速度之下離心10min，收集上清液，即得粗酶；

步驟2：取1mL步驟1中的粗酶，將該粗酶加入到27%PEG1000/13%NaH₂PO₄體系中，攪拌混合均勻，靜置分相后，取出PEG相，將取出的PEG相加入到27%PEG1000/13%NaH₂PO₄/6%(NH₄)₂SO₄體系中，攪拌混合均勻，靜置分相后，對由磷酸二氫鈉與硫酸銨組成的無機(jī)鹽相進(jìn)行透析、濃縮和冷凍干燥，得到純化后的植物酯酶粉末，然后再將該植物酯酶粉末用蒸餾水溶解得到植物酯酶酶液；

步驟3：配制濃度為70～165μmol/L四苯基鋅卟啉溶液，其中四苯基鋅卟啉的粉末為溶質(zhì)，?N,N-二甲基甲酰胺為溶劑；

步驟4：將步驟2制備的植物酯酶酶液、步驟3制備的四苯基鋅卟啉溶液及pH值為6.5～7.25的磷酸鹽緩沖液均勻混合得到四苯基鋅卟啉～植物酯酶復(fù)合溶液，其中植物酯酶酶液，四苯基鋅卟啉溶液和pH值為6.5～7.25的磷酸鹽緩沖液的體積比為1：0.5～2：48.5～47；

步驟5：使用紫外分光光度計(jì)檢測步驟4中制得的四苯基鋅卟啉～植物酯酶復(fù)合溶液對波長300nm～750nm的光波的吸收光譜曲線；

步驟6：將步驟2制備的植物酯酶酶液、步驟3制備的四苯基鋅卟啉溶液和pH值為6.5～7.25的磷酸鹽緩沖液均勻混合，再加入待測樣品N,N～二甲基甲酰胺清洗液，攪拌均勻混合后得到樣品混合溶液，其中植物酯酶酶液，四苯基鋅卟啉溶液，pH值為6.5～7.25的磷酸鹽緩沖溶液和待測樣品的N,N～二甲基甲酰胺清洗液的體積比為1：0.5～2：42～43.5：5；

步驟7：使用紫外分光光度計(jì)檢測步驟6中制得樣品混合溶液對波長300nm～750nm的光波的吸收光譜曲線；

步驟8：對步驟5測得的吸收光譜曲線與步驟7測得的吸收光譜曲線進(jìn)行比較，如果兩個光譜曲線完全相同，則待測樣品的N,N～二甲基甲酰胺清洗液中不含有克百威或克百威的含量超出了本方法的檢測限；如果兩個光譜曲線不同，則待檢測樣品中含有克百威。

2.如權(quán)利要求1所述的克百威殘留量的檢測方法，其特征在于：步驟3中制得四苯基鋅卟啉溶液的濃度為70μmol/L；步驟4中加入的磷酸鹽緩沖液pH值為6.5，制得的四苯基鋅卟啉-植物酯酶復(fù)合溶液中，植物酯酶酶液，四苯基鋅卟啉的溶液和pH值為6.5的磷酸鹽緩沖液的體積比為1：2：47；步驟6中，制得的樣品混合溶液中植物酯酶酶液，四苯基鋅卟啉溶液，pH值為6.5的磷酸鹽緩沖溶液和待測樣品的N,N～二甲基甲酰胺清洗液的體積比為1：2：42：5。

3.如權(quán)利要求1所述的克百威殘留量的檢測方法，其特征在于：步驟3中制得四苯基鋅卟啉溶液的濃度為90μmol/L；步驟4中加入的磷酸鹽緩沖液pH值為7.0，制得的四苯基鋅卟啉-植物酯酶復(fù)合溶液中，植物酯酶酶液，四苯基鋅卟啉的溶液和pH值為7.0的磷酸鹽緩沖液的體積比為1：1.5：47.5；步驟6中，制得的樣品混合溶液中植物酯酶酶液，四苯基鋅卟啉溶液，pH值為7.0的磷酸鹽緩沖溶液和待測樣品的N,N～二甲基甲酰胺清洗液的體積比為1：1.5：42.5：5。

4.如權(quán)利要求1所述的克百威殘留量的檢測方法，其特征在于：所述檢測方法適用于大豆、甘蔗、水稻、蔬菜、水果和食品中克百威殘留量的檢測。