[發明專利]檢測半胱氨酸蛋白酶抑制劑C的免疫比濁試劑盒及其制備方法

無效

• 申請號: 201210345895.3
• 申請日: 2012-09-18
• 公開（公告）號: CN102879569A
• 公開（公告）日: 2013-01-16
• 發明（設計）人: 劉照關;康英杰
• 申請（專利權）人: 蘇州照康生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/531
• 代理公司: 南京蘇科專利代理有限責任公司 32102
• 代理人: 王玉國;陳忠輝

技術領域

本發明涉及免疫比濁的檢測方法，尤其涉及檢測半胱氨酸蛋白酶抑制劑C的免疫比濁試劑盒及其制備方法。

背景技術

半胱氨酸蛋白酶抑制劑C快速檢測試劑盒，可用于人尿液、血漿和血清檢測。血清半胱氨酸蛋白酶抑制劑C是一個比較接近理想的反映腎小球濾過功能的內源性標志物，研究資料已表明，半胱氨酸蛋白酶抑制劑C是較血清肌酐(Scr)有更高的敏感性和特異性，較為理想的反映腎小球濾過率（GFR）的內源性標志物。

在腎移植中的應用：在腎移植術中，移植腎的GFR可作為觀察急、慢性排斥反應及免疫抑制劑的腎毒性指標之一，靠緩慢升高的Scr往往不能及時、準確反映移植腎的GFR等功能，而Cystatin?C則可作為監測腎移植功能的良好指標。

在糖尿病中的應用：血Cystatin?C是一個比較敏感和實用的檢出糖尿病腎病的指標，通過定期檢查糖尿病患者的血清Cystatin?C，可及時發現GFR改變。

在高血壓病中的應用：40%以上的高血壓病患者在中、晚期可并發高血壓腎病。據臨床觀察研究發現：高血壓致腎損害分為三個階段：其中第一階段腎小球濾過率基本正常，而腎內壓增加；第二階段腎小管高壓性損傷，出現α-微球蛋白等，以及腎小球早期損傷，血Cystatin?C升高；第三階段腎小球硬化，腎小管萎縮，血Cystatin?C明顯升高。所以，臨床定期監測高血壓病患者的血清Cystatin?C水平，可以及時發現高血壓病所導致的早期腎功能損傷，為開展早期預防、診斷和治療創造條件。

顆粒增強免疫透射比濁法（particle—enhanced?turbidimetric?immunoassay，PETIA）是近年來出現的一種較為穩定、準確的體液蛋白均相免疫比濁檢測方法，其基本原理是一定粒徑膠乳顆粒的表面交聯單克隆或多克降抗體，當交聯有抗體的微球與抗原結合后，在短時間內會迅速聚集在一起，改變了反應體系的吸光度。這種改變與被測抗原的濃度有一定的相關性，在一定范鬧內可以反映被測抗原的濃度。此技術通過顆粒增強的方式，放大了抗原抗體反應，彌補了普通透射比濁法靈敏度不夠的缺點，同時又繼承了透射比濁法穩定性好、方便快速的優點，克服扎ELISA和RIA方法的缺點，已越來越廣泛應用于臨床上各種微量蛋白的定量檢測。日前，膠乳增強免疫透射比濁法區廣泛用于脂蛋白a、C反應蛋白、抗鏈球菌溶血素0的檢測，取得了良好的社會效益，但國內外至今尚未見有此類半胱氨酸蛋白酶抑制劑C檢測試劑盒問世。

發明內容

本發明的目的是提供一種檢測半胱氨酸蛋白酶抑制劑C的免疫比濁試劑盒及其制備方法。

本發明的目的通過以下技術方案來實現：

檢測半胱氨酸蛋白酶抑制劑C的免疫比濁試劑盒，特點是：包括盒體、應用液瓶、抗體懸浮液瓶和標準品瓶，所述應用液瓶、抗體懸浮液瓶和標準品瓶放置于盒體內，所述應用液瓶中裝有應用液，應用液的組分及其重量百分比為：表面活性劑0.01%~2%，防腐劑0.01~1%，氯化鈉0.1%~20%，緩沖液10~200mmol/L；所述抗體懸浮液瓶中裝有包被半胱氨酸蛋白酶抑制劑C單克隆抗體的乳膠懸液，乳膠懸液的組分及其重量百分比為：包被半胱氨酸蛋白酶抑制劑C單克隆抗體的乳膠0.05%~0.5%，表面活性劑0.01%~2%，防腐劑0.01~1%，緩沖液10~200mmol/L；所述標準品瓶中裝有半胱氨酸蛋白酶抑制劑C標準品。

進一步地，上述的檢測半胱氨酸蛋白酶抑制劑C的免疫比濁試劑盒，所述應用液中的表面活性劑為Triton-X100、Triton-X405、Tween-20、Tween-40或Tween-80；所述應用液中的防腐劑為疊氮鈉或Proclin-300或兩者混合物；所述應用液中的緩沖液為磷酸鹽、碳酸鹽、三羥基氨基氨基甲烷或甘氨酸。所述乳膠懸液中的表面活性劑為Triton-X100、Triton-X405、Tween-20、Tween-40或Tween-80；所述乳膠懸液中的防腐劑為疊氮鈉、Proclin-300或兩者混合物；所述乳膠懸液中的緩沖液為磷酸鹽、碳酸鹽、三羥基氨基氨基甲烷或甘氨酸。

本發明檢測半胱氨酸蛋白酶抑制劑C的免疫比濁試劑盒的制備方法，包括以下步驟：

a）制備乳膠懸液：在磷酸鹽緩沖液中將乳膠微球與包被半胱氨酸蛋白酶抑制劑C單克隆抗體混勻，30~40度旋轉反應過夜，用清洗儲存液進行清洗得到乳膠懸液，置于2~8度環境下保存；

b）制備應用液：?將表面活性劑、防腐劑、氯化鈉和緩沖液同溶于水，得到應用液；