[發明專利]解淀粉芽孢桿菌Ba168及其發酵培養方法和應用

有效

• 申請號: 201210342838.X
• 申請日: 2012-09-14
• 公開（公告）號: CN102839142A
• 公開（公告）日: 2012-12-26
• 發明（設計）人: 楊軒;翟楓;楊長鎖;安德榮
• 申請（專利權）人: 楊凌綠都生物科技有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A01N63/02;A01P3/00;C12R1/07
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技術領域

本發明屬于利用有益微生物對植物病害進行生物防治的領域，具體涉及解淀粉芽孢桿菌(Bacillus?amylolquefaciens)Ba168菌株，以及該菌株的發酵生產及其發酵產物對防治植物病原菌的作用。

背景技術

植物病害的流行不但引起作物減產，給人類造成重大經濟損失，甚至帶來災難性后果。植物病害的危害還會導致農產品品質低劣，不堪使用或加工，甚至導致人畜中毒。為防治植物病害，化學農藥因為具有成本低、見效快、省時省力等優點曾一度成為人們的首選，但是，化學農藥一般不可降解，隨著化學農藥的大量使用，引發了環境污染、生態破壞、食品污染等事件。這使研究開發利用生物農藥成為植物保護工作者的重要研究課題。生物農藥是指利用生物活體或其代謝產物針對農業有害生物進行殺滅或抑制的制劑，具有安全、高效、無污染等特點，與保護生態環境和社會協調發展的要求相吻合，是未來農藥發展的必然趨勢。

微生物農藥是生物農藥中應用最為廣泛的一類，也是生物防治的重要材料。微生物源農藥的主要成分是微生物活體及其次生代謝產物，由于微生物種類多樣，其活性也很廣泛，包括殺蟲、殺菌、除草以及植物生長調節作用等。自然界中用于生防細菌的，主要有芽孢桿菌屬、假單胞菌屬。特別是近幾年，利用微生物防治植物真菌性病害由于對環境安全，可以減緩病原菌產生抗藥性，已經成為當前防治植物病害的主流方法。

解淀粉芽孢桿菌是一種嗜溫、好氧、產芽孢的桿狀細菌，其生理特征多樣，該菌在自然界中廣泛存在，對人畜無毒無害，不污染環境，能產生多種抗菌素和酶，具有廣譜抗菌活性和極強的抗逆能力。解淀粉芽孢桿菌不僅可以在土壤、植物根際體表等外界環境中廣泛存在，而且是植物體內常見內生細菌，尤其是在植物的根、莖內部。解淀粉芽孢桿菌通過成功定殖至植物根際、體表或體內，改變其周圍菌群環境和種類，與病原菌競爭植物周圍的位點，并且分泌多種抗菌物質以抑制病原菌生長，同時誘導植物防御系統抵御病原菌入侵，從而達到改良土壤和生防的目的。

尖孢鐮刀菌是一類既可侵染植物又可在土壤中生存的兼性寄生真菌，用化學農藥難于防治，屬于頑固性病害。該類病菌和其他植物病原菌一樣，存在著種下分化，可侵染許多寄主植物，具有多種專化型。其中，侵染中草藥的塊根、塊莖的一部分專化型為尖孢鐮刀菌Fusarium?oxysporum?Shl，該菌可引起常見中草藥的根腐病等病害，而塊根、塊莖和鱗莖等恰好是許多名貴中藥材的藥用部位，經濟價值高，而尖孢鐮刀菌的侵染使中藥材的藥用價值下降，另外，病原菌可以在病殘體和土壤中過冬，一旦發病，笠年仍會引起作物病害，持續影響作物產量，給我國中藥材產業造成巨大的損失。

發明內容

本發明的目的在于公開了一種解淀粉芽孢桿菌Ba168?CGMCC?No.6462。

本發明的第二個目的在于公開了解淀粉芽孢桿菌Ba168的發酵方法，以及由該方法制備所得的發酵液。

本發明的第三個目的在于公開了解淀粉芽孢桿菌Ba168殺菌劑及其制備方法。

本發明的第四個目的在于公開了上述解淀粉芽孢桿菌Ba168、由解淀粉芽孢桿菌Ba168制備所得的發酵液以及解淀粉芽孢桿菌Ba168殺菌劑在制備防治由尖孢鐮刀菌屬引起的作物根腐病藥物中的應用。

本發明的目的是通過以下技術方案實現的：

一種解淀粉芽孢桿菌Ba168，CGMCC?No.6462，該解淀粉芽孢桿菌Ba168的16S?rDNA如序列表1所示。

解淀粉芽孢桿菌Ba168的發酵方法，其中，所述發酵方法是以權利要求1所述的解淀粉芽孢桿菌Ba168為原料，包括下述步驟：

(1)、菌種活化：將解淀粉芽孢桿菌Ba168菌種接種到LB試管斜面上面，于30℃活化培養48h，所述LB培養基配方為酵母浸膏5g，蛋白胨10g，NaCl?5g，瓊脂15～20g，水1000ml，pH?7.4～7.6，連續轉接3代，確保菌株純度后，再接種到種子液中使用。

(2)、種子液的制備：從斜面上挑取菌接種到裝有LB培養基的三角瓶中，于恒溫振蕩培養箱中振蕩培養，即得到種子液，所述的LB培養基配方為：蛋白胨10g，NaCl?10g，水1L，酵母浸膏5g，pH7.0；

(3)、發酵培養：將種子液先后進行種子罐發酵培養和大規模工業發酵培養，得到發酵液；其中種子罐發酵培養和大規模工業發酵培養步驟如下：

種子罐發酵培養：FJ液體培養基，裝料系數0.7，培養條件：26～28℃，48h，接種量：9%，通氣量：2.5L/min，攪拌轉速：200r/min；