[發明專利]一種高效制備重組人堿性成纖維細胞生長因子的方法在審
| 申請號： | 201210341883.3 | 申請日： | 2012-09-17 |
| 公開（公告）號： | CN103667329A | 公開（公告）日： | 2014-03-26 |
| 發明（設計）人： | 徐明波;賈東晨;王俊玲;王喜鶴;秦富景;陳獻華;吳彥卓 | 申請（專利權）人： | 北京雙鷺藥業股份有限公司;北京雙鷺生物技術有限公司 |
| 主分類號： | C12N15/70 | 分類號： | C12N15/70;C12R1/19 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 100049 北京*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 高效 制備 重組 堿性 纖維 細胞 生長因子 方法 | ||
【權利要求書】：
1.一種采用基因工程方法高效制備重組人堿性成纖維細胞生長因子(rh-bFGF)的方法，其主要步驟是：
1)人工合成如SEQ?ID?NO.1所述的人堿性成纖維細胞生長因子的人工編碼序列，該序列的5’及3’端還可包含可以接受的限制性核酸內切酶酶切位點保護堿基、限制性核酸內切酶酶切位點、起始密碼子和終止密碼子；
2)采用適當的限制性核酸內切酶酶切上一步驟合成的基因，并采用DNA連接酶連接到同樣酶切的可接受的大腸桿菌表達載體，該載體可以是但不限于pBV220、pET系列載體等原核表達載體；
3)將步驟2)獲得的連接產物轉化大腸桿菌獲得表達重組人堿性成纖維細胞生長因子的基因工程菌，所述大腸桿菌可以是但不限于JM109、DH5α、BL21等大腸桿菌；
4)步驟3)獲得的大腸桿菌經過誘導表達、發酵，菌體中的目標產物可以達到全菌蛋白的25％以上，然后經提取純化，獲得重組人堿性成纖維細胞生長因子原料。
2.權利要求1所述方法在制備藥用重組人堿性成纖維細胞生長因子中的應用。
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