[發(fā)明專利]表達(dá)豬圓環(huán)病毒2型Cap蛋白的重組豬痘病毒載體疫苗及其制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210340309.6
• 申請日: 2012-09-14
• 公開（公告）號: CN102824634A
• 公開（公告）日: 2012-12-19
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 范紅結(jié);藺輝星;陸承平
• 申請（專利權(quán)）人: 范紅結(jié);藺輝星;陸承平
• 主分類號: A61K39/12
• 分類號: A61K39/12;A61K48/00;C12N15/34;C12N15/39;C12N15/863;A61P31/20
• 代理公司: 北京匯澤知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11228
• 代理人: 張瑾

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物制品領(lǐng)域，本發(fā)明涉及一種表達(dá)豬圓環(huán)病毒2型Cap蛋白的重組豬痘病毒載體疫苗，該疫苗專用于加強(qiáng)豬對PCV2的免疫保護(hù)，減少養(yǎng)豬業(yè)的經(jīng)濟(jì)損失。

背景技術(shù)

豬圓環(huán)病毒2型（PCV2）是引起斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征（Post-weaning?Multisystemic?Wasting?Syndrome,?PMWS）的主要病原，還與豬皮炎與腎病綜合征（Porcine?Dermatitis?and?Nephropathy?Syndrome,?PDNS）等疾病密切相關(guān)。Cap是PCV2的主要結(jié)構(gòu)蛋白，具有良好的抗原性，能刺激機(jī)體產(chǎn)生特異性抗體，與PCV2致病性和機(jī)體的免疫保護(hù)作用密切相關(guān)，一直是研制PCV2疫苗的焦點(diǎn)。現(xiàn)有技術(shù)中已有多種用PCV2的Cap蛋白的編碼基因為目的基因構(gòu)建的用于防治豬圓環(huán)病毒的疫苗，其中所用載體各不相同，例如原核質(zhì)粒、桿狀病毒等。但是未見使用痘病毒載體報道，更未見使用豬痘病毒載體構(gòu)建用于防治PCV2的疫苗的報道。

重組痘病毒載體疫苗已經(jīng)有近30年的安全應(yīng)用，作為表達(dá)載體，痘病毒有許多特有的優(yōu)點(diǎn)：(1)凍干疫苗較穩(wěn)定、費(fèi)用低、容易進(jìn)行生產(chǎn)和使用；(2)疫苗有多種用藥途徑，包括口服，尤其是針對野生動物進(jìn)行免疫預(yù)防時，給藥特別方便；(3)接種一次就能獲得長期的免疫效果，能誘導(dǎo)抗外來抗原的抗體和細(xì)胞毒性T細(xì)胞反應(yīng)；(4)基因組容易組裝，允許大片段的基因丟失或刪除，以及外源DNA的插入。?

應(yīng)用重組痘病毒已經(jīng)成功地表達(dá)了來源于動植物，乃至人類的許多種基因。被表達(dá)的外源蛋白在感染細(xì)胞中能忠實地進(jìn)行修飾，與其它哺乳動物病毒表達(dá)載體相比，具有較高的表達(dá)效率。通過對動物接種重組痘病毒的辦法，能了解外源蛋白對個體的作用以及機(jī)體的免疫應(yīng)答。表達(dá)抗原基因的重組痘病毒，可作為基因重組疫苗。痘病毒作為基因重組活疫苗的載體，不需佐劑即可免疫動物，病毒在體內(nèi)增殖過程中產(chǎn)生的外源蛋白可刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答，不僅誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生體液免疫，而且誘導(dǎo)很強(qiáng)的細(xì)胞免疫。目前常用表達(dá)載體的痘病毒主要有：痘苗病毒、禽痘病毒等。豬痘病毒載體構(gòu)建疫苗乃本發(fā)明人獨(dú)創(chuàng)。?

本發(fā)明人經(jīng)過大量實驗成功構(gòu)建了表達(dá)Cap的重組豬痘病毒載體疫苗，由于豬痘病毒為豬源病毒，能在免疫豬體內(nèi)進(jìn)行有效的增殖，因而以其為載體構(gòu)建的疫苗相對于其他載體疫苗取得了更好的免疫效果。?

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是研制一種能夠有效控制豬圓環(huán)病毒的重組豬痘病毒載體疫苗，對豬圓環(huán)病毒病的防治工作提供有力的支持。

一方面，本發(fā)明提供了一種豬圓環(huán)病毒2型的Cap蛋白的編碼基因，其具有如SEQ?ID?NO:?3所示的核苷酸序列。?

另一方面，本發(fā)明提供了一種重組豬痘病毒(rSPV-cap)，該重組豬痘病毒是在豬痘病毒載體中插入本發(fā)明所述cap基因重組制備得到的。?

在優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明所述cap基因具有如SEQ?ID?NO:3所示的核苷酸序列。?

本發(fā)明通過動物免疫試驗發(fā)現(xiàn)：本發(fā)明提供的重組豬痘病毒能夠在免疫動物體內(nèi)大量增殖，表達(dá)目的蛋白Cap，能夠誘導(dǎo)動物體內(nèi)產(chǎn)生較高效價的抗體,并對免疫動物產(chǎn)生良好的保護(hù)作用。?

因此，另一方面，本發(fā)明提供了一種疫苗，其中含有本發(fā)明所述的重組豬痘病毒和一種或多種藥物學(xué)上可接受的載體或佐劑。該重組豬痘病毒包含豬痘病毒載體和本發(fā)明所述的cap基因。?

在一個優(yōu)選實施方案中,所述的cap基因具有如SEQ?ID?NO:?3所示的核苷酸序列。?

在一個優(yōu)選實施方案中,所述的豬痘病毒載體為VR-363。?

另一方面，本發(fā)明提供了本發(fā)明所述的重組豬痘病毒及含有其的疫苗組合物在制備預(yù)防和/或治療豬圓環(huán)病毒引發(fā)的疾病的藥物中的用途，優(yōu)選用于制備預(yù)防和/或治療豬圓環(huán)病毒2型引發(fā)的疾病的藥物中的用途。?

本發(fā)明中所述的豬圓環(huán)病毒2型引發(fā)疾病包括斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征（PMWS）、豬皮炎與腎病綜合征（?PDNS）等疾病。?

本發(fā)明所述的重組豬痘病毒及含有其的疫苗組合物的免疫接種途徑包括但不限于肌肉注射等。?

另一方面，本發(fā)明提供了一種制備重組豬痘病毒的方法，該方法包括：?

（1）利用基因工程方法構(gòu)建通用穿梭載體pUSG11/P28；

（2）利用特異性引物對擴(kuò)增豬圓環(huán)病毒2型（PCV2）Cap蛋白的編碼基因cap；